自身抗體檢測項目及臨床意義

多數自身免疫病患者血清中都會出現自身抗體。

雖然有些自身抗體在疾病中的確切意義尚未得到嚴格的證實，但其與疾病的相關性已得到認可，所以這些自身抗體在自身免疫病的診斷和療效評價方面都具有重要的意義。

一、抗核抗體

抗核抗體（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。

ANA的性質主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。

ANA可以與不同來源的細胞核起反應，無器官特異性和種屬特異性。

ANA主要存在於血清中，也可存在於其他體液如滑膜液、胸水和尿液中。

ANA在SIE患者的滴度較高，但也出現在其他許多自身免疫病中，在許多研究報告中，都將檢出ANA作為自身免疫甚至自身免疫病存在的依據。

這種現象的機制尚未明了，有待於進一步研究。

（一）ANA的類型及意義

由於細胞核成分的複雜性，不同成分的抗原性也不同；因此就會有多種不同的ANA。

1．抗核蛋白抗體核蛋白抗原（DNP）由DNA和組蛋白組成。

由於DNP抗原存在不溶性和可溶性兩個部分，可分別產生相應的抗體。

不溶性DNP抗體通常不完全被DNA和組蛋白所吸收，它是形成狼瘡細胞的因子；可溶性抗原存在於各種關節炎病人的滑膜液中，其相應抗體也出現於RA病人的滑膜液中。

2．抗DNA抗體可以分為兩大類：①抗天然DNA（nDNA）抗體，或稱抗雙鏈DNA（dsDNA）抗體；②抗變性DNA抗體，或稱抗單鏈DNA（ssDNA）抗體。

抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性，70％～90％的活動期SLE病人該抗體陽性，效價較高，並與病情有關。

抗ssDNA抗體可見於多種疾病中，特異性較差。

3．抗ENA抗體可提取性核抗原（ENA）多從動物的胸腺中提取。

先將胸腺勻漿並破碎細胞，分離出細胞核；再經鹽水或磷酸鹽緩衝液處理後，很容易從胞核中提取出來。

ENA不含DNA，對核糖核酸酶敏感。

近年來的研究表明，ENA可分為十幾種，現僅介紹幾種主要的ENA及其相應抗體。

（1）抗PNP抗體：PNA即核糖核蛋白，對核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加熱561h變性。

抗PNP抗體多見於混合性結締組織病。

高效價的抗PNP抗體對混合性結締組織病有診斷意義，

而低效價的抗PNP抗體可在SIE患者中發現。

（2）抗Sm抗體：該抗體在一名Smith姓的患者血中首次發現，便以其名字的前兩個字母命名。

Sm抗原系非核酸性糖蛋白，對DNase及RNase均不敏感，但經碘酸鹽及胰蛋白酶處理後可被水解。

抗Sm抗體是SLE的特異性標誌之一，但陽性率偏低，約為30％～4％；可能是SIE的一種回憶性抗體，故在非活動期亦可檢出。

若將抗dsDNA和抗Sm抗體同時檢測，可提高SLE的診斷率。

（3）抗SS-A抗體：SS-A為乾燥綜合徵（SS）的A抗原，可從動物胸腺的胞漿中提取。

抗SS-A抗體主要見於SS，但也可見於其他自身免疫病如SLE中。

（4）抗SS-B抗體：SS-B為SS的B抗原，亦可從動物胸腺或小鼠肝細胞漿中提取，可被胰蛋白酶、輕度加熱或改變溶液pH而破壞。

13％的SLE及30％的SS患者有抗SS-B抗體。

（5）抗組蛋白抗體（AHA）：組蛋白是一種鹼性蛋白質，含有大量的賴氨酸及精氨酸。

目前已經發現組蛋白抗原可分為5個亞單位：H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4。

抗組蛋白抗體及其抗亞單位抗體見於SLE及藥物誘發的LE。

SLE病人血清中的抗組蛋白亞單位抗體檢出率順序為：抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A及抗H-4，以抗H-2B和抗H-1為主，並與SLE的活動性有關。

（二）ANA的檢測方法

由於ANA的複雜性及多樣性，故測定方法繁多。

目前ANA常用的方法有免疫螢光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術等。

1．免疫螢光法檢測血清總ANA最常用的方法是螢光免疫組化法。

多用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質，結果比較穩定可靠，在螢光顯微鏡下見到的細胞核有螢光著色為陽性反應。

如將患者血清先進行不同比例的稀釋，可以做大致的定量試驗，在1:80稀釋仍然雖陽性時，對SLE的診斷有較大的參考價值。

在油鏡下觀察結果，可以將ANA陽性的螢光現象分成4種主要的螢光核型，核型的確定對臨床診斷有進一步的參考價值。

①周邊型表示抗DNA抗體存在；②均質型表示有抗DNP抗體；③斑點（顆粒）型多為抗ENA抗體；④核仁型多為抗核小體抗體。

SLE患者常出現周邊型、勻質型或混合型，斑點型多見於混合結締組織病，而硬皮病多為核仁型；周邊型對SLE有較高的特異性。

近年有人用錐蟲或血鞭毛蟲（例如綠蠅短膜蟲試驗）作基質測定抗dsDNA抗體，因為這些血寄生蟲的動基體內含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾；在陽性結果時，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的螢光。

因此該試驗用於測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優點。

另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養殖，來源方便，值得推廣。

2．放射免疫法常用檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。

①Farr法的原理為用同位素標記DNA，被標記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結合，經50％硫酸銨飽和液沉澱，然後比較沉澱物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結合活性，一般結合率大於20％為陽性。

②過濾法是在分離結合物時用纖維素酯薄膜濾器（孔徑為0.45μm）進行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結合的複合物被阻留在濾膜上。

3．ELISA臨床上主要是應用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重複性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。

目前已有試劑盒供應。

4．免疫印跡（immunoblotting）先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區帶，然將這些帶轉印到硝酸纖維素膜上，最後用酸標抗體或放射性同位素標記抗體進行檢測和分析。

由於該試驗不需純化的單個抗原，可在同一固相上作多項分析檢測，靈敏度高，特異性強。

故目前已廣泛用於自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。

另外，還可用傳統的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結合試驗等。

這些試驗要求的實驗條件比較低，但敏感性也比較低。

二、類風濕因子

類風濕因子（RF）是抗變性IgG的自身抗體，主要為19S的IgM，也可見7S的IgG及IgA。

它能與人或動物的變性IgG結合，而不與正常IgG發生凝集反應。

RF主要出現在類風濕性關節炎患者，約70％～90％的血清中和約60％的滑漠液中可檢出IgG類RF，這很可能是自身IgG變性所引起的一種自身免疫應答的表現。

IgG是感染等原因誘導的免疫應答中的主幹抗體，這些抗體與相應抗原結合時會發生變性；此外，在炎症等病理條件下滑漠或其他部位可能產生不正常的IgG；這些變性IgG就構成自身抗原，刺激免疫系統產生各種抗IgG抗體。

滑膜液中的IgG類RF與變性IgG結合而形成中等大小的免疫複合物，比血清中的IgM類RF更具有致病意義，因為這一類免疫複合物易於沉積在關節滑膜等部位，可激活補體，形成慢性漸進性免疫炎症性損傷。

RF的檢測最初是用致敏綿羊紅細胞凝集試驗（Rose-Waaler法）進行檢測，目前最常採用IgG吸附的膠乳顆粒凝集試驗；但此法的靈敏度和特異性均不高，而且只能檢出血清中的IgM類RF。

IgG類和IgA類RF則需要用RIA或ELISA等方法檢測。

RF在類風濕性關節炎患者中的檢出率很高，RF陽性支持早期RA的傾向性診斷，如對年輕女性應進行RA和風濕熱間的鑑別；而對非活動期RA的診斷，需參考病史。

但RF也象ANA一樣，並不是RA獨有的特異性抗體。

在SLE病人均有50％RF陽性，在其他結締組織病如SS、硬皮病、慢性活動性肝炎及老年人中均可有不同程度的陽性率。

三、其他自身抗體

（一）抗甲狀腺球蛋白及微粒體抗體

這類抗體可以針對甲狀腺的多種成分，以甲狀腺球蛋白和微粒體為代表。

抗體主要是IgG，可以介導ADCC活性，引起慢性淋巴細胞性甲狀腺炎，又稱喬本（Hashimoto）甲狀腺炎。

檢測方法多用免疫螢光技術，以甲狀腺組織的冰凍切片作基質。

也可用RIA、ESISA等方法進行檢查。

強陽性反應或高滴度抗體對喬本甲狀腺炎和原發性甲狀腺功能減退症有診斷意義，抗體變化對於疾病治療轉歸的評價甚為重要，對喬本甲狀腺炎與甲狀腺功能亢進的鑑別診斷也有較大價值。

正常人血清中很少檢出甲狀腺抗體，或僅有5％～10％無疾病症狀人群有低度反應；女性和年齡較大的人群檢出率較高。

檢出該抗體可提示既往患過自身病，也可能是自身免疫病的早期指標。

在甲狀腺功能亢進(Graves病)患者的血清中存在甲狀腺刺激抗體(TSAb)，包括長效甲狀腺刺激素(LATS)和LATS者(LATS-P)。

這些抗體作用於甲狀腺細胞表面的TSH受體，使受體活化並促進甲狀腺素的釋放；過多的甲狀腺素引起機體的代謝亢進。

（二）抗乙醯膽鹼受體抗體

抗乙醯膽鹼受體（AchR）抗體可結合到橫紋肌細胞的乙醯膽鹼受體上，引起運動終板的破壞，使神經－肌肉之間的信號傳導發生障礙，導致骨髓肌運動無力，稱為重症肌無力（myastherniagravis，MG）。

疾病可發於任何年齡，最先出現的症狀常是眼肌無力，進而累及其他部位，常呈進行性加重。

抗AchR抗體多用較敏感的方法進行檢測。

①ELISA法：以α-銀環蛇毒素包被酶標板，並與骨骼肌勻漿（含AchR）作用，再加入待測血清和對照血清，最後加酶標抗體。

試驗的正常結果為陰性或≤0.03mmol/L。

②放免法：將放射性同位素標記的α-銀環蛇毒素與骨骼勻漿結合，再加入患者血清和抗人IgG使之沉澱，檢測沉澱物的放射性。

抗AchR抗體的檢測對MG具有診斷意義，且特異性和敏感性較高，大約90％的MG患者陽性；伴有眼肌症狀的病人，抗體效價低於普通症狀的病人；同時還用來監測對該疾病免疫抑制治療的效果。

肌萎縮側索硬化症患者用蛇毒治療後可出現假陽性。

（三）抗平滑肌抗體

抗平滑肌抗體（ASMA）產生機制不明，但與肝和膽管的自身免疫疾病有關，尤其是慢性活動性肝炎（狼瘡性肝炎）和原發性膽汁性肝硬化（PBC）。

該類疾病的發生與自身免疫性密切相關，試驗結果有助於診斷以及與其他肝病的鑑別診斷。

ASMA的檢測用間接免疫螢光法，用大鼠胃大彎或小彎的冰凍切片作基質；正常結果為陰性或≤1:20。

檢出陽性率較高的疾病有慢性活動性肝炎和PBC；而在肝外性膽汁阻塞、藥物誘發性肝病、急性病毒性肝炎及肝細胞癌等時ASMA的檢出率極低。

（四）抗心肌抗體

在心肌受損（例如手術、感染或梗塞等）時，心肌細胞內的物質釋出，作為隱蔽抗原刺激機體產生抗體。

這些抗體與心臟結合可導致新的免疫性損傷，例如心包切開綜合徵、風濕性心臟病等。

抗心肌抗體的檢測用胎兒或大鼠心肌的冰凍切片作抗原基質，進行免疫螢光檢測，正常值為陰性。

陽性結果相關的疾病有：心臟術後綜合徵、心肌梗塞後綜合徵和風濕性心臟病等。

（五）抗線粒體抗體（AMA）檢測

抗線粒體抗體（AMA）所針對的抗原是內層線粒體膜，無器官特異性和種屬特異性。

該抗體主要是IgG，與PBC相關，但對肝細胞或膽管沒有直接的損傷效應，在疾病中的作用尚不明確。

AMA用免疫螢光法進行檢測，用大鼠腎的冰凍切片作基質；也可用補體結合試驗來檢測。

正常結果為陰性或效價在1:5以下。

PBC患者可有79％～94％為陽性反應或效價≥1:160；長期持續性肝阻塞、慢性活動性肝炎；、原因不明性肝硬化等也可呈陽性反應。

但是肝外性黃疸為陰性。

（六）抗胃壁細胞抗體

抗胃壁細胞抗體（APA）可以破壞胃粘膜的壁細胞，使內因子產生障礙，有時也可發現抗內因子抗體而使其功能受阻，從而導致惡性貧血的發生。

患者可無前驅症狀或患有胃炎。

APA常以間接免疫螢光法檢測，用人或家兔的胃冰凍切片作抗原基質，正常成人為陰性反應，正常兒童可有2％～20％的檢出率。

惡性貧血患者能檢出抗胃壁細胞或抗內因子抗體。

而其他各種貧血患者不能檢出其中任何一種抗體。

胃潰瘍或胃癌等極少該抗體陽性。

（七）抗胰島素抗體

抗胰島素抗體在體內可與胰島素結合形成抗原抗體複合物，使胰島素的活性明顯降低甚至無效；從而導致胰島素依賴性糖尿病，必需注入大量胰島素才能有療效。

該抗體主要為IgG，其他4類Ig也存在；其中IgE類抗體可引起病人的變應性反應，IgM類可能引起胰島素耐受。

檢測抗胰島素抗體及其免疫球蛋白類別可用各種瓊脂擴散試驗、間接血凝和ELISA等方法，試驗結果會有助於糖尿病的分型診斷及適當治療。

此外，還可用於監測病人的胰島素耐量。

（八）抗腎小球基底膜抗體

抗腎小球基底膜（GBM）抗體多產生在鏈球菌感染後，為共同抗原交叉誘導產生。

抗GBM抗體可引起GBM損傷，導致腎小球腎炎的發生。

抗GBM抗體的檢測也是用螢光或酶免疫組化法，用動物或人的腎組織冰凍切片作抗原基質。

陽性反應可見與腎小球血管走行相一致的螢光染色或酶底物染色；這與免疫複合物時斑塊狀分布的染色現象完全不同。

試驗正常值為陰性。

該試驗主要用於腎小球腎炎的分型診斷與鑑別診斷。

約5％的腎小球腎炎由抗GBM抗體引發，為自身免疫性。

（九）抗精子抗體

正常情況下精細胞是隱蔽抗原，但當外傷、手術或感染時，精子可與免疫系統接觸，誘導機體產生抗精子抗體。

高滴度的抗精子抗體可使精細胞的活力下降甚至數量減少，是導致男子不育症的原因之一。

在部分女性也可檢出抗精子抗體，可能與不孕症相關。

抗精子抗體的檢測方法很多，例如精子制動試驗、精子凝集試驗、免疫螢光法、ELISA法和免疫珠結合法等。

抗精子抗體陽性相關的疾病有實驗性輸精管阻塞和輸精管切斷等，一部分婦女和孕婦也可檢出抗精子抗體。

（十）抗血細胞抗體

抗紅細胞抗體主要涉及ABO的Rh血型抗體及自身免疫性抗體，與輸血、新生兒溶血症和自身免疫性溶血性貧血等相關。

抗血小板和抗白細胞抗體等均與自身免疫性血液病相關。

四、其他免疫學檢測

（一）淋巴細胞檢測

雖然自身免疫病多與自身抗體有關，但仍有部分疾病不存在相關的自身抗體，而與致敏淋巴細胞有關，還可能與免疫調節異常或其他因素有關。

這些相關因素的檢測對疾病的診斷有一定的參考意義。

1．特異性致敏淋巴細胞在潰瘍性結腸炎、外周神經炎及實驗性變態反應性腦脊髓炎等疾病，可能與自身反應性致敏淋巴細胞有關。

雖然這些淋巴細胞在疾病中的確切作用要比自身抗體的作用更難證實，但相關性本身也具有一定參考價值。

檢測致敏淋巴細胞可用器官特異性抗原作誘導劑，進行淋巴細胞轉化試驗或吞噬細胞移動抑制試驗等；皮膚試驗也能反映機體致敏情況，但有誘導致敏性或誘發變態反應的危險。

實驗結果需結合臨床或其他檢查進行綜合分析。

2．在免疫缺陷病或免疫失調時容易發生自身免疫病，所以進行淋巴細胞數量及亞群比例的檢查也有一定意義。

檢測內容包括淋巴細胞總數、T和B細胞分類計數及CD4/CD8亞群比例測定等。

（二）狼瘡細胞試驗

狼瘡（LE）細胞是胞漿內含有大塊狀聚合DNA的中性粒細胞。

狼瘡病人血清中的抗核抗體可誘導LE細胞的形成，因此稱為LE因子。

用病人血清與正常人中性粒細胞一起培養，可使後者變成LE細胞。

該試驗稱為狼瘡細胞試驗，試驗過程更要3天連續重複進行。

系統性紅斑狼瘡病人有75％～80％呈陽性。

在RA、硬皮病、部分肝炎、結節性動脈炎、多發性硬化症、皮肌炎和變態反應病等偶爾可呈陽性反應。

現已證明至少有十幾種藥物可誘發LE細胞試驗陽性。