精索靜脈曲張實驗研究進展(第十三章)

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本章要點

◆應用動物模型(如狗、兔子、大鼠等)進行精索靜脈曲張病理生理研究已經有30餘年的歷史。

動物模型中以大鼠最為常用。

◆精索靜脈曲張大鼠造模中按0.8mm縮窄左腎靜脈，觀察術後7-11周，精索靜脈曲張成模率較高。

◆如需行大鼠精液分析，可收集左側附睪尾部精子。

人類精索靜脈曲張研究受倫理學等方面的影響，很難完成設計合理的隨機、對照和雙盲研究，而在獲取人類精索靜脈組織方面就更加困難。

受年齡、職業、環境及個體差異等諸多因素的影響。

因此精索靜脈曲張動物模型在研究精索靜脈曲張中顯得非常重要。

精索靜脈曲張僅存在於直立行走的人類，而在其他哺乳類動物中並不存在。

有研究顯示，通過部分結紮左側腎靜脈建立左側精索靜脈曲張動物模型與人類精索靜脈曲張比較，二者之間引流附睪及睪丸血液的靜脈從精索靜脈為主轉變為骼血管為主，這種重新分布具有相似性(Turner et al，1994)。

一、實驗大鼠的選擇

大鼠的青春期通常為(50±10)日，可選擇鼠齡6-7周，體重170-220g的SD(張秋養等，2002)或Wistar雄性大鼠(Sahin et al，2005; Wang et al，2010)作為青春期大鼠。

大鼠的飲食和生活環境應完全相同，並置於濕度和溫度相對穩定的室內飼養環境中，生活環境要求12小時明/暗周期。

術前大鼠需適應性飼養7天，手術組及假手術組動物術前及術後各禁食24小時。

二、精索靜脈曲張造模手術

大鼠精索靜脈走行與人類類似，左側大部分匯聚為一支，與腎上腺靜脈對側呈直角匯人左腎靜脈。

故造模術中可以將腎上腺靜脈作為尋找精索靜脈匯入點的解剖標誌。

1. Turner腎靜脈縮窄術(Turner et al，2001)

左腎靜脈縮窄術術後可能影響到的靜脈回流，見圖1-13-1。

大鼠以水合氯醛腹腔麻醉：大鼠腹腔注射10%的水合氯醛(1ml/300g)。

麻醉成功後應用大鼠板固定，取大鼠劍突下腹部正中切口，逐層切開入腹，將腹內容物推向右上腹，於左側腹膜後顯露左腎靜脈，游離部分左腎靜脈後，在左腎上腺靜脈與腹背靜脈之間的左腎靜脈段放置一直徑0.85mm的金屬杆，以4-0的絲線將金屬杆與左腎靜脈一併結紮，結紮完成後小心抽出金屬杆，可見左腎靜脈擴張迅速。

觀察2min，確定左腎無缺血後，逐層縫合切口(圖1-13-2)。

文獻顯示實驗性左側精索靜脈曲張造模術中腎靜脈縮窄程度有以下幾種：1mm (Saypol et al, 1981), 0.85mm (Turner et al, 2001), 0.8mm (Liang et al,2015; Zhang et al, 2008; Chang et al, 2010; Yu et al, 2011; Tian et al, 2014),0.65mm(Kilin6 et al，2004; Zha et al，2011)。

我們的精索靜脈曲張動物造模中按0.8mm縮窄左腎靜脈，觀察術後7-11周精索靜脈曲張成模率較高。

2.改良的精索靜脈曲張造模手術(Yu et al，2011)

大鼠精索靜脈與髂血管之間存在交通支，改良造模手術中除縮窄左腎靜脈以外，還尋找左精索靜脈與左髂總靜脈之間的交通支，確定後仔細分離，用絲線結紮(圖1-13-3)。

用此種方法建立左精索靜脈曲張的動物模型，成功率明顯提高。

假手術組建模：顯露左腎靜脈後，只是於左腎靜脈穿線打空結，而不縮窄左腎靜脈。

三、術後取材時間的選擇

造模術後取材時間的選擇，爭議較大。

文獻顯示：術後4周、6周、8周、12周時間梯度中，術後4周即可出現精索靜脈曲張，8周即可出現睪丸曲細精管的形態學的改變(Salama et al，2003;Sahin et al，2005; Tu et al，2012)。

大鼠的生精周期相較人類的生精周期要短，我們選擇大鼠的一個生精周期(7周)作為取材的時間點，觀察到既有明顯的精索靜脈曲張，又能觀察到附睪、睪丸形態學的變化。

精索靜脈曲張模型建立成功的標誌為：左精索靜脈直徑>1mm，雙腎重量無明顯差別，如圖1-13-4所示。

造模術後取材時可選擇腹腔麻醉後開腹取材。

麻醉成功後取腹部正中切口，切開後顯露腹膜後，分離粘連，觀察雙腎大小情況，測量精索靜脈直徑。

如需留取血樣，可以皮試針穿刺左腎靜脈縮窄處遠端取血。

顯露游離睪丸和附睪，可分別稱重。

病理標本的留取需以Bouin's液保存為宜。

如需行大鼠精液分析，可收集左側附睪尾部精子(Yuan et al，2010)：取材時快速切取左附睪，剪取附睪尾組織0.03-0.05g，置於添加2ml生理鹽水的培養皿中(37℃預熱Smin)，快速剪碎附睪尾組織後37℃恆溫2min，搖勻，取懸濁液iOpi滴加到血細胞計數板上(37℃預熱)。

應用計算機輔助精液分析(CASA)或人工鏡檢行精子濃度及精子活動率(前向運動+非前向運動，progressive+ non-progressive，PR+NP)的檢測。

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