精子的形態分析，你需要了解

文： 鮑布和

精子正常形態

（a、b）：體外結合於透明帶的精子，Shorr染色；

（c）：性交後宮頸粘液中的精子，巴氏染色。

塗片的製作與染色

每份新鮮的精液標本應製備2張以上的塗片。

每次取樣前要充分混勻精液。

對於未稀釋的精液，採用拉薄技術；對於已洗滌的精液，採用移液管法。

要用鉛筆做記號，記號筆會脫色。

染色時2張塗片背靠背，使染色時間一致。

用水沖洗已染色的塗片的力度和時間也要儘量一致。

（a）未經稀釋的精液的塗片方法；

（b）洗滌後的精子懸液的塗片方法。

在精液液滴之前「拉」，而不要在液滴之後「推」

精液塗片的厚度，影響因素有：

液體的體積(10 µl)…………體積越小，則精子分散越好

拉片的角度( 45°)…………角度越大，則塗片越薄

塗片的速度(~1 秒)…………速度越高，則片子越厚

空氣乾燥的精液塗片，如果固定會出現的缺點：

脫水…………………………比濕片小

剪切力………………………不成熟的精子頭膨脹

滲透損傷……………………胞漿小滴的丟失，過多的殘餘胞漿滯留

推薦採用Papanicolaou、Shorr或Diff-Quik染色法。

使用光學顯微鏡觀察，精子頭部頂體區為淺藍色、頂體後區為深藍色，中段略呈紅色，尾部為藍色或紅色。

殘餘的胞漿小滴染成粉紅色或橙紅色。

3種染色方法的選擇

Shor若採用人工分析精子形態，建議用巴氏染色法，塗片可以永久保存，符合質控要求。

Diff-Quik染色法適合CASA，只有3個步驟，用時不足一分鐘，但塗片不能保存。

所以CASA必須能夠保存每條精子的形態圖片，而且要有圖像回放功能才符合質控要求。

r染色法與巴氏染色的效果近似，步驟較少，塗片可以長期保存，適合人工分析。

改良巴氏染色

有20個步驟，耗時40-60分鐘。

脫色時間長短影響染色強度。

染色背景較淺。

Diff-Quik染色

有4個步驟，耗時1-2分鐘。

僅精子表面著色，對細胞膜影響小。

背景較深。

精子形態

正常精子形態

精子頭部長度為4.0-5.0um,

寬度為2.5-3.5um,

長寬之比為1.50-1.75，

頂體界限清晰，占頭部的40%-70%，

中段稍細，寬度<1um,約為頭部長度的1.5倍，

尾部直，均一，比中段細，非捲曲，長度約為45um，

形態異常精子

1.畸形精子：頭部畸形、中段偏厚、雙尾

2.畸形精子：頭部畸形、中段畸形

3.畸形精子：梨形頭、中段彎曲、不規則、胞漿小滴過多

4.畸形精子：頭部畸形

5.畸形精子：梨形頭

6.畸形精子：頭部畸形

形態異常精子

19畸形精子：頭部畸形、空泡數>2

20.畸形精子：頭部正常、頂體>70%

21.畸形精子：頭部畸形、頂體>70%.

22.畸形精子：頭部畸形、頂體<40%

23畸形精子：頭部畸形、頂體<40%

對於頭部異常的描述

對於頸和中段異常的描述

對於主段異常的描述

非精子細胞

未評估精子

精子多重缺陷的指標

畸形精子指數（the teratozoospermia index ，TZI)=缺陷總數/缺陷精子數

精子畸形指數（the sperm deformity index ，SDI)=缺陷總數/精子總數

TZI等於1表示每個異常精於只有一種缺陷，TZI等於3則表示每個異常精子都有頭部、中段和尾部缺陷。

所以，TZI反映的是每個精子的缺陷程度，是針對每個精子個體而言，而精子密度、活動率、前向活動率和正常形態以及SDI是就每一份精液的整體而言。

要提醒注意的是，畸形精子指數的數值介於1．00和3．00之間。

以前的報導提示，"TZI>1.6與未經治療不育夫婦的低生育率有關，而且SDI 1.6是體外受精失敗的閾值。

這些參數預示精子在體內和體外的功能情況。

例：使用六鍵計數器每次計數200條精子。

在第1次計數時，42條正常158條異常。

在158條異常精子中，140條有頭部缺陷，102條有頸部缺陷，30條有尾部缺陷，44條有多餘的胞漿小滴殘留。

在第2次計數時，36條正常，164條異常。

其中122條有頭部畸形，22條頸部畸形，36條有多餘的胞漿小滴。

計算TZI時，用總的畸形數(140+102+30+44+122+108+22+36 = 604畸形)除以異常精子數(158+164 = 322), TZI = 604/322 = 1.88； SDI= 604/400=1.51 。

計算機輔助精子形態學計量分析的優勢

CASA的影像分析使精子形態學分析評估量化，能獲得更多的精子特徵參數。

自動分析系統比手工操作具有更好的客觀性、精確性和可重複性，變異係數＜7%, 甚至比熟練的操作人員更精確。

面對門診量巨大，人力不足的情況，還要把精子形態學分析列為常規檢查，同時執行嚴格的質控措施，確實有許多困難。

使用CASA是最好的出路（可任意選擇15%標準或4%標準）。