螢光原位雜交技術&臨床價值

王興光 滄州市人民醫院

隨著社會信息化的發展，人們生活節奏不斷加快，當發現自身健康出現異常信號時，都會異常緊張與擔憂，因此作為醫務工作者，不僅要能夠做出正確的疾病診斷和疾病治療，還要儘可能縮短診斷的時間，緩解患者緊張的心情，為疾病的治療做出充分的準備，螢光原位雜交技術以其快速、準確的特點廣泛應用於臨床實踐。

【技術原理】

螢光原位雜交（英文簡稱FISH），是一項在體外直接觀察細胞中特定核酸的技術。

其主要原理：根據鹼基互補配對原則，將特定的DNA序列與細胞內的目標序列互補結合，探針帶有螢光，在合適的激發光照射下，雜交探針與目標DNA能夠在螢光顯微鏡下被清楚的觀察到。

該技術在臨床應用中具有快速、準確的特點，並且操作相對簡單。

操作示意圖如下：

【臨床價值】

一、FISH應用於Her-2基因檢測

酪氨酸激酶-人類表皮生長因子受體2（Her-2）在20%-30%乳腺癌患者中有基因的擴增和蛋白的過度表達。

臨床研究表明，Her-2陽性的乳腺癌浸潤性強、無病生存期短、預後差，針對這部分病人，使用曲妥珠單抗（赫賽汀）治療有效。

目前通常使用的免疫組織化學方法無法區分Her-2中度陽性的患者是否存在Her-2基因的擴增，直接檢測Her-2基因擴增水平的螢光原位雜交技術被認為檢測乳腺癌Her-2基因擴增的的「金標準」。

二、FISH應用於ALK基因斷裂檢測

間變性淋巴瘤激酶（ALK）屬於胰島素受體超家族，能與多種基因發生融合，在人類的多種惡性腫瘤中發現，如非小細胞肺癌，ALK重排導致ALK基因的異常激活，進而通過激活下游信號通路導致細胞增殖和生成，促進腫瘤生長。

ALK融合基因首次發現於2007年，研究表明ALK融合基因突變可誘導肺癌的發生，給予ALK酪氨酸激酶抑制劑腫瘤可迅速消退，現已有相關藥物批准上市用於治療ALK陽性的NSCLC患者。

三、FISH在產前診斷中的應用

1992年，Klinger首次前瞻性的使用FISH，將診斷時間縮短為24-48小時，並且美國醫學遺傳學會(ACMG)、加拿大婦產科醫生協會(SOGC)指南中明確指出FISH具有與金標準幾乎相同的靈敏性和特異性，無需參考傳統的細胞遺傳學檢測結果，單獨檢測結果同樣可信。

FISH應用於產前診斷領域主要針對13\18\21\X\Y五條染色體數目異常進行分析。

五條染色體異常占所有染色體異常的70%；占新生兒有意義的染色體異常的85-90%；FISH技術針對這五條染色體數目異常快速檢測；與核型分析互為質控作為產前診斷的雙保險；彌補核型分析實驗失敗無結果的問題，爭取最佳治療時間。

FISH檢測主要適應人群適用人群：唐氏篩查高危人群；超聲檢測發現與染色體相關的標記或畸形；孕婦年齡大於35歲；曾有遺傳病家族史或攜帶者；曾有原因不明的流產史、畸形史、死胎；有明顯的致畸因素及接觸史等。

FISH在診斷產前染色體數目異常方面具有重要意義。

尤其在唐氏篩查高風險，孕婦精神高度緊張的情況下，FISH檢測能使孕婦在很短的時間內得到相關染色體的結果。

另外，FISH在流產組織的檢測中同樣具有重要意義，對部分流產組織進行檢測發現，一部分存在染色體數目的異常，如16-三體、22-三體、16-單體、22-單體等等。

【注意事項】

1.羊水標本要注意：在羊水穿刺時，是否有母血的污染。

2.石蠟切片標本要注意：胃蛋白酶消化時間，時間不宜過短，防止細胞間質消化不徹底。

3.肺部穿刺標本要注意：由於穿刺液通常較少，操作要更加謹慎。

4.注意變性溫度和雜交溫度，並且加探針及以後操作環節要避光，加探針後要密封好。

5.在螢光顯微鏡下閱片時，要注意雜點信號的干擾，嚴格按標準計數。

總之，螢光原位雜交技術在臨床上具有重要的應用價值，在疾病診斷及病情判斷方面顯示了極大的優勢。

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