檢量線(Calibration Curve)的建立 - 層析專家新丹企業有限公司

檢量線的製作幫助您HPLC的定量分析，但是定量前我們必須要先了解偵測儀器的對於 ... 藍色點是理想的檢量線(呈現性，並漂亮的通過原點)，這使我們可以以100-900 ppm作為 ... 層析分析專家新丹企業有限公司   層析專家新丹企業有限公司 檢量線(CalibrationCurve)的建立 9/19/2011 2Comments   檢量線的製作幫助您HPLC的定量分析，但是定量前我們必須要先了解偵測儀器的對於分析物的最低偵測極限(LOD，表示您的偵測器最低濃度極限)以及最大偵測極限(表示高於此濃度您的偵測器已經偏離正確濃度值)，然後選擇合適您的濃度範圍製作檢量線。

因此在還沒有任何關於您的儀器以及分析物偵測極限的資訊前，可能需要先進行一些試驗來獲得這些資訊。

首先您必須先確定您的HPLC分析方法以及移動相是否能有效分離您的混合物樣品。

接著針對欲分析物的標準品(假設已知標準品最高濃度為1mg/ml=1000ppm)，依序列稀釋製備標準品溶液高、中、低三種濃度(如1000ppm,500ppm,50ppm等)1，以您的HPLC層析方法進行分析(建議至少三重複試驗)。

由您的層析圖譜判讀，假設最高濃度1000ppm超出偵測器的偵測範圍，請稀釋濃度(如900ppm甚至更低)到儀器的可以分析的範圍；假設低濃度50ppm還可以偵測出來，請試著稀釋更低的濃度(如25ppm,10ppm,甚至1ppm-0.1ppm，若是10ppm可以分析圖譜可以偵測得到，而1ppm卻無法偵測，此時我們認為您的針測最低極限為10ppm，也有可能更低如9ppm,8ppm等)。

在獲知儀器的偵測範圍後，我們可以選擇合適的濃度範圍進行檢量線的製作(在這裡我們假設以100-900ppm作檢量線)。

外標準品法─我們稀釋標準品濃度為900,800,700,600,500,400,300,200,100ppm九種濃度(可依據您的需要選擇採樣點，但建議至少需求五點以上)，接著進行HPLC分析以濃度對積分面積作圖，假設得到以下結果：藍色點是理想的檢量線(呈現性，並漂亮的通過原點)，這使我們可以以100-900ppm作為檢量線的適合濃度範圍，並計算得知此定量方程式；而紅色點表示儀器偵測在800ppm以上與200ppm以下的偵測濃度已經開始偏移(200ppm以下分析物濃度由儀器偵測已經不準確)，建議您使用200-800ppm(甚至300-700ppm)以內的範圍取樣點製作檢量線與計算定量方程式。

內標準品法─內標準品法類似外標準品法，只是在我們配置標準品濃度時同時加入了另一種已知物質標準品(此標準品必須自身穩定，不與分析物混合樣品發生反應、不干擾試驗分析物的滯留時間並且可以被相同的HPLC分析方法所偵測到)。

我們同樣配置標準品濃度為900,800,700,600,500,400,300,200,100ppm九種濃度(每種濃度裡頭都內含等量的標準品如100ppm)，接著進行HPLC分析並已以濃度對積分面積比(分析物標準品積分面積/內標準品積分面積2)作圖，並依據作圖結果製作合適的檢量線定量方程式。

註1.一開始可以就設定多些的濃度取樣點，不僅限於三中濃度，以免需要重覆重新配置。

註2.作圖方法：假設900ppm分析物標準品積分面積為90000，100ppm內標準品積分面積為5000，因此得到分析物標準品積分面積/內標準品積分面積為18；同理，800ppm分析物標準品積分面積為80000，100ppm內標準品積分面積為5000，得到分析物標準品積分面積/內標準品積分面積為16，我們就依據濃度對此積分面積比製作檢量線方程式。

註3.分析物如果於HPLC分析太濃，請稀釋至適合濃度作分析。

關鍵字：HPLC,偵測極限,檢量線Author:Cheng-ChiehHsu新丹企業有限公司SCIENIFICHIGHTEKCO.,LTD.TEL:(02)2652-2200 FAX:(02)2653-0022 E-Mail:[email protected] 2Comments 梁先生 8/15/201803:14:15am 敬啟者: 請問有機藥物之不純物(含量很小，可能0.15%而已)，在實務操作上要怎麼測。

需要用不純物(relatedsubstance)稱量來做嗎，因為量很少，市面上不一定買的到，怎麼做?!或這只需用主成份(標準品較多)配製成主成份的0.05%,0.1%,0.2%...代替即可?!不需用實際的不純物來操作檢量線。

Reply 梁丕偉 8/21/201805:30:32pm 敬啟者: 請問有機藥物之不純物(含量很小，可能0.15%而已)，在實務操作上要怎麼測。

需要用不純物(relatedsubstance)稱量來做嗎，因為量很少，市面上不一定買的到，怎麼做?!或這只需用主成份(標準品較多)配製成主成份的0.05%,0.1%,0.2%...代替即可?!不需用實際的不純物來操作檢量線。

Reply LeaveaReply. 關於我們 新丹企業有限公司成立於1980年，我們以服務層析儀器及環境分析儀器使用者為宗旨，並以誠懇、務實、專業的精神，為消費者提供滿意的服務。

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