老鼠肝臟轉錄因子其結構與功能之研究
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本論文永久網址: 複製永久網址Twitter研究生:葉淑媛研究生(外文):YE,SHU-YUAN論文名稱:老鼠肝臟轉錄因子其結構與功能之研究論文名稱(外文):OnthestructureandfunctionofmurinelivertranscriptionfactorAGP/EBP指導教授:呂勝春指導教授(外文):LU,SHENG-CHUN學位類別:碩士校院名稱:國立臺灣大學系所名稱:生化科學研究所學門:生命科學學門學類:生物科技學類論文種類:學術論文論文出版年:1991畢業學年度:79語文別:中文論文頁數:68中文關鍵詞:老鼠、肝臟、轉錄因子、基因序列、氨基酸、質体外文關鍵詞:PET-PLASMID相關次數:
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al-acidglycoprotein是肝臟為應付緊急生理需求-發炎,高燒等症狀時會快速產生之蛋白質之一。
因此研究此基因之起動子(promoter)與其調節子(regulatoryfactor),AGP/EBP,之間的作用關系,將有助於吾人明白基因轉錄的調控機制。
本論文首先篩選(screen)出大老鼠的AGP/EBP基因,定出基因序列(sequence),共1333個鹼基對(bps),可轉訊297個氨基酸,并且和小老鼠的序列比較,發現只有一個氨基酸不同,再和其他調節子(如:C/EBP)做基因與氨基酸的序列比較,發現在其羧基端有basicaminoacid以及leucinezippe特殊結構,初步將之歸入C/EBP家族之一員。
接著將此調節子基因接入質體(pET-plasmid)再轉染大腸菌使其在其中表現增殖,再經適當的純化步驟得到一個合成蛋白(recombinantprotein)。
將此recombinantpr-otein及nuclearextract分別做gelretardation與DNaseIfootprinting分析,得知此調節子(AGP/EBP)具備有接在起動子(promoter)上某些特殊核酸接合區(DNA-bindingmotif)-C,D,E之潛力。
因此本論文的研究轉入兩個方面來探討:一者將此調節子(AGP/EBP)氨基端做適當刪減(deletion),接入表現質體(reporterplasmid)利用同時轉染(cotransfection)及CATassay初步區分其transcriptionactivationdomain;再者利用起動子之不同變祑種(mutants),以及多元化(oligomerized)之特殊接合區C,D,E,以同時轉染(cotrans-fection)方式來探討起動子-AGP/EBP在不同的核酸接合區-C,D,E,所扮演之角色是同雙子或異雙子。
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