淺談水貂阿留申病及檢測方法

水貂是珍貴的毛皮動物，毛皮的經濟價值較高，因此在中國的養殖規模日漸擴大。

目前在水貂養殖過程中出現的水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AD)對水貂養殖業造成極為嚴重的經濟損失，僅在我國每年造成的損失保守估計超過60億。

由於危害嚴重，AD是造成世界養貂業經濟損失的三大病毒性傳染病之一。

在我國水貂養殖的主要區域，AD感染率約為50~60%之間，最高甚至可達80%以上。

由此可見水貂阿留申病在我國嚴重的流行狀況，應引起養殖戶和科研院所的足夠重視。

目前大都通過對流免疫電泳和碘凝集實驗淘汰陽性個體，以期建立無AD的陰性貂群，但實際上很難將其完全清除。

研製開發針對AD的疫苗，一直是動物醫學界棘手的問題。

自發現AD以來，國內外專家學者從未間斷對該病的研究，國外對AD的研究起步較早，對AD的致病機理的研究已經達到分子水平。

國外學者對ADV的研究主要集中ADV的流行病學調查，遺傳變異性分析，探究ADV的變異趨向以及組成病毒衣殼的結構蛋白、非結構蛋白的基因組成、原核真核表達，嘗試進行AD疫苗的研發。

各國研究人員對AD的流行規律及免疫機理進行了不懈的研究，但是由於該病特殊的免疫機理，疫苗免疫不能起到較好的預防作用，而且到目前為止國內外普遍認為通過免疫預防對該病進行控制和清除較為困難。

而且也未研製出有效疫苗進行控制，當然病毒病的預防和清除最終還是要通過免疫預防來完成，只是限於對於ADV研究尚淺，疫苗的研發進程較慢。

我國對AD的研究起步較晚，近年來隨著養殖規模的擴大，該病的危害也越來越嚴重，各地研究人員開始在分子和蛋白水平對ADV進行了大量研究，填補了國內對ADV研究的空白。

阿留申病毒(Aleutian disease parvovirus,ADV)是細小病毒科，細小病毒屬成員。

病毒呈二十面體對稱，直徑24-35nm，沒有囊膜，氯化銫中的密度為1.43-1.44

患病貂和潛伏期的帶毒貂是本病散播病毒的主要傳染源。

病毒主要存在於病貂的血液、肝臟、腎臟、脾臟，也可通過唾液、糞尿等途徑排出和擴散。

AD的傳播途徑常見有水平傳播和垂直傳播。

接觸傳播是水平傳播的一種方式，大都通過消化道、呼吸道感染。

垂直傳播經胎盤，直接傳染給子代，經檢測ADV陽性母貂乳汁中也有ADV的存在，經由哺乳途徑發生的感染，也可作為ADV垂直傳播的另一種方式。

水貂阿留申病的潛伏期一般為60~70d，有的長達7-9個月，個別可長達1年以上，呈慢性進行性感染。

本病主要引起腎小球腎炎、動脈炎和肝炎。

臨床上表現為緩慢發展的進行性疾病的症狀，表現為食欲不振，嚴重虛弱，漸進性消瘦、高度口渴、尿毒症及痙攣和排出呈煤焦油樣糞便。

AD是一種慢性免疫抑制性疾病，能夠降低水貂抵抗力，容易導致機體繼發感染其它病原微生物，最終引起死亡。

特徵表現為持續性病毒血症、漿細胞增多、丙種球蛋白異常增多和腎小球腎炎。

研究發現AD是典型的免疫複合物疾病，病毒的靶細胞是巨噬細胞，導致機體免疫功能紊亂。

產生的大量抗體不僅不能中和病毒，反而通過介導抗體依賴性增強作用（Antibody dependent enhancement,ADE）進一步幫助ADV對靶細胞侵染過程。

而且形成的較大循環免疫複合物體積沉積在血管內皮細胞表面和腎小球濾過膜上，引起補體激活從而造成腎小球腎炎和動脈血管炎等，這也是目前該病通過疫苗預防效果不好的主要原因。

探究ADE作用對ADV免疫影響是攻克該病的主要突破口之一。

鑒於目前預防免疫接種並不能起到預防該病的效果，對該病的研究大多集中於如何建立一種快速診斷方法。

最早用於檢測ADV的方法是碘凝集試驗(IAT)。

原理是水貂感染ADV後，在血清內白蛋白和球蛋白的比例發生變化，r-球蛋白增多，遇到魯戈氏碘試劑會出現大塊絮狀凝聚物。

但由於水貂感染12 d後才會出現r-球蛋白增多，不能用於AD早期檢測，而且用該方法診斷易出現假陽性或假陰性現象。

早期感染，抗體產生較少，出現假陰性結果；結核病和其他肝腎疾病也可以導致r-球蛋白增多，出現假陽性結果，所以該方法在實踐中應用不是很廣泛。

目前國際上公認的用於ADV檢測的方法主要是對流免疫電泳（CIEP)。

原理是利用從病貂組織中提取已知特異性抗原與被檢血清反應，當抗原和抗體比例適當，抗原與抗體接觸時，如果能在瓊脂平板上出現一條清晰的白色沉澱線則可說明血清中抗體陽性。

吳威等參照國外研究人員製備抗原的過程，獲得了新的CIEP細胞抗原，並應用於水貂的檢測，電泳檢測沉澱線清晰，是目前國內應用最普遍的檢測方法之一。

該方法可以檢測出感染6~9 d的病貂，特異性和敏感性較好，在實踐中應用廣泛。

但由於本實驗可能有散毒，而且標準抗原的價格較高，可能會增加一些規模較小的養殖場經濟成本，該方法有其缺陷。

PCR方法進行ADV檢測是最近幾年才出現新型技術，此法用於ADV檢測的靈敏性和準確度均高於CIEP和IAT實驗，但由於需要的設備較昂貴、耗時較長、投資較大等因素，使該技術目前僅限於實驗室的檢測和應用。

目前運用PCR方法多用於擴增ADV的一段目的基因，一方面檢測毒株的核酸同源性及翻譯胺基酸後的序列比對，進行遺傳變異分析，另一方面用於原核、真核表達載體的構建。

AD是一種慢性病毒感染性疾病，該病潛伏期較長，發病後主要呈慢性經過，較少出現急性和大批死亡，可以在較長時間內不出現顯著的臨床表現，所以對於AD的重視程度遠不如犬瘟熱和細小等急性傳染病。

但實際上，水貂阿留申病的流行，對我國水貂養殖業造成了巨大的經濟損失，不能低估其破壞力，應引起足夠的重視。

在研發出有效疫苗之前，當務之急是應該建立多種診斷的方法，淘汰陽性個體，建立無AD的陰性群。

溫建新 青島農業大學動物科技學院