DNA测序仪_百度百科

DNA测序仪原理 ... 分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定dna片段 ... 百度首页 网页 新闻 贴吧 知道 网盘 图片 视频 地图 文库 百科 首页 历史上的今天 百科冷知识 图解百科 秒懂百科 懂啦 秒懂本尊答 秒懂大师说 秒懂看瓦特 秒懂五千年 秒懂全视界 特色百科 数字博物馆 非遗百科 恐龙百科 多肉百科 艺术百科 科学百科 用户 蝌蚪团 热词团 百科校园 分类达人 百科任务 百科商城 知识专题 权威合作 合作模式 常见问题 联系方式 下载百科APP 个人中心 收藏 查看我的收藏 0 有用+1 已投票 0 DNA测序仪 播报 编辑 锁定 讨论 上传视频 特型编辑 用于DNA测序的设备 DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。

自动化测序实际上已成为当今dna序列分析的主流。

美国peabi公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等dna测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。

中文名 DNA测序仪 全    称 abiprism310型基因分析仪 属    性 高档精密仪器 公    司 美国peabi公司 相关视频查看全部 目录 1 原理 2 发展历史 3 试剂器材 4 操作步骤 5 计算 6 注意事项 DNA测序仪原理 编辑 播报 abiprism310型基因分析仪(即dna测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddntp(标记终止物法)，因此通过单引物pcr测序反应，生成的pcr产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链dna混合物，使得四种荧光染料的测序pcr产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。

由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的ccd(charge-coupleddevice)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在ccd摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为dna序列，从而达到dna测序的目的。

分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定dna片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。

pe公司还提供凝胶高分子聚合物，包括dna测序胶(pop6)和genescan胶(pop4)。

这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。

它主要由毛细管电泳装置、macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。

电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。

它使用最新的ccd摄影机检测器，使dna测序缩短至2.5h，pcr片段大小分析和定量分析为10～40min。

由于该仪器具有dna测序，pcr片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行dna测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(sscp)、微卫星序列分析、长片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析，临床上可除进行常规dna测序外，还可进行单核苷酸多态性(snp)分析、基因突变检测、hla配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。

DNA测序仪发展历史 编辑 播报 70年代末，WalterGilbert发明化学法、FrederickSanger发明双脱氧终止法手动测序，同位素标记80年代中期，出现自动测序仪（应用双脱氧终止法原理）、荧光代替同位素，计算机图象识别90年代中期，测序仪重大改进、集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳2001年完成人类基因组框架图 DNA测序仪试剂器材 编辑 播报 1．bigdye测序反应试剂盒主要试剂是bigdyemix，内含pe专利四色荧光标记的ddntp和普通dntp，amplitaqdnapolymerasefs，反应缓冲液等。

2．pgem-3zf(+)双链dna对照模板0.2g/l，试剂盒配套试剂。

3．m13(-21)引物tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。

4．dna测序模板可以是pcr产物、单链dna和质粒dna等。

模板浓度应调整在pcr反应时取量1μl为宜。

本实验测定的质粒dna，浓度为0.2g/l，即200ng/μl。

5．引物需根据所要测定的dna片段设计正向或反向引物，配制成3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。

如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。

6．灭菌去离子水或三蒸水。

7．0.2ml或和0.5ml的pcr管盖体分离，pe公司产品。

8．3mol/l醋酸钠(ph5.2)称取40.8gnaac·3h2o溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调ph至5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。

9．70%乙醇和无水乙醇。

10．naac/乙醇混合液取37.5ml无水乙醇和2.5ml3mol/lnaac混匀，室温可保存1年。

11．pop6测序胶abi产品。

12．模板抑制试剂(tsr)abi产品。

13．10×电泳缓冲液abi产品。

14．abiprism310型全自动dna测序仪。

15．2400型或9600型pcr仪。

16．台式冷冻高速离心机。

17．台式高速离心机或袖珍离心机。

DNA测序仪操作步骤 编辑 播报 pcr测序反应(1)取0.2ml的pcr管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂：所加试剂测定模板管标准对照管bigdyemix1μl1μl待测的质粒dna1μl－pgem-3zf(+)双链dna－1μl待测dna的正向引物1μl－m13(-21)引物－1μl灭菌去离子水2μl2μl总反应体积5μl，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧pcr管，用手指弹管混匀，稍离心。

(2)将pcr管置于9600或2400型pcr仪上进行扩增。

98℃变性2min后进行pcr循环，pcr循环参数为96℃10s，50℃5s，60℃4min，25个循环，扩增结束后设置4℃保温。

醋酸钠/乙醇法纯化pcr产物(1)将混合物离心，将扩增产物转移到1.5mlep管中。

(2)加入25μl醋酸钠/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀dna。

12000r/min于4℃离心30min，小心弃上清。

(3)加70%(v/v)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。

12000r/min于4℃离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10～15min。

电泳前测序pcr产物的处理(1)加入12μl的tsr于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解dna沉淀，稍离心。

(2)将溶液转移至盖体分离的0.2mlpcr管中，稍离心。

(3)在pcr仪上进行热变性(95℃2min)，冰中骤冷，待上机。

分析或打印出彩色测序图谱上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立运行的测序顺序文件。

仪器将自动灌胶至毛细管，1.2kv预电泳5min，按编程次序自动进样，再预电泳(1.2kv，20min)，在7.5kv下电泳2h。

电泳结束后仪器会自动清洗，灌胶，进下一样品，预电泳和电泳。

每一个样品电泳总时间为2.5h。

电泳结束后仪器会自动分析或打印出彩色测序图谱。

序列分析仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。

如测序序列已知，可通过序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。

处理仪器测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。

DNA测序仪计算 编辑 播报 测序反应精确度计算公式：100%－差异碱基数(不包括n数)/650×100%差异碱基即测定的dna序列与已知标准dna序列比较不同的碱基，n为仪器不能辨读的碱基。

DNA测序仪注意事项 编辑 播报 1．abiprism310基因分析仪是高档精密仪器，需专人操作、管理和维护。

2．本实验测序pcr反应的总体积是5μl，而且未加矿物油覆盖，所以pcr管盖的密封性很重要，除加完试剂后盖紧pcr管盖外，最好选用pe公司的pcr管。

如pcr结束后pcr液小于4～4.5μl，则此pcr反应可能失败，不必进行纯化和上样。

3．作为测序用户来说，只需提供纯化好的dna样品和引物，一个测序pcr反应使用的模板不同，需要的dna量也就不同，pcr测序所需模板的量较少，一般pcr产物需30～90ng，单链dna需50～100ng，双链dna需200～500ng，dna的纯度一般是a260nm/a280nm为1.6～2.0，最好用去离子水或三蒸水溶解dna，不用te缓冲液溶解。

引物用去离子水或三蒸水配成3.2pmol/μl较好。

4．本实验使用的测序试剂盒是bigdye荧光标记终止底物循环测序试剂盒，一般可测dna长度为650bp左右。

本仪器dna测序精确度为(98.5±0.5)%，仪器不能辨读的碱基n<2%，所需测定的长度超过了650bp，则需设计另外的引物。

为保证测序更为准确，可设计反向引物对同一模板进行测序，相互印证。

对于n碱基可进行人工核对，有时可以辨读出来。

为提高测序的精确度，根据星号提示位置，可人工分析该处彩色图谱，对该处碱基作进一步核对zhua曲子白渡白颗 百度百科内容由网友共同编辑，如您发现自己的词条内容不准确或不完善，欢迎使用本人词条编辑服务（免费）参与修正。

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