质粒与载体_实验方法_丁 通 - 丁香通

一、质粒 绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。

... 原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。

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它的特点是结合了pUCs的质粒载体特色与线状噬菌体的DNA复制特色，故称为phagemid。

线状噬菌体(filamentousphage)是一群以线状单链DNA为基因体，以大量单一种类蛋白质(B蛋白)呈螺旋状包裹的极细长噬菌体。

它们藉由性线毛的协助感染宿主，基因体进入宿主后会环状化(circulization)并复制互补链成为双绞链。

DNA复制以rollingcircle方式产生大量单链基因体DNA。

基因体DNA被壳蛋白包裹后从宿主中「穿出」，并不会杀死宿主。

将线状噬菌体f1的复制原切出植入质粒中并不会影响质粒的复制。

但如果以适当的helper线状噬菌体感染含有phagemid的宿主时，phagemid就会产生大量的单链DNA。

这些phagemid单链DNA也会被包入噬菌体壳蛋白中，并且包入的单链DNA与当初f1复制原在phagemid上的方向有关(+或-)。

如此你就可以从宿主细胞中纯化phagemid双链DNA从事选殖等用途；从噬菌体中纯化单链DNA从事定序工作。

载体pETs(如pET12a、pET25b，MoffattandStudier,1986)则是结合了pBR322、pUCs或pBluescripts等的载体功能与噬菌体T7的基因调控。

它的命名与外星人ET无关，而是结合了expression和T7system。

T7是溶菌型噬菌体。

它在感染大肠杆菌后，首先利用宿主RNA聚合�及核醣体制造出包含T7RNA聚合�及T7蛋白激�(proteinkinase)等噬菌体早期蛋白。

T7蛋白激�将宿主RNA聚合�磷酸化使之失去活性；T7RNA聚合�马上接管宿主细胞中所有的转录工作。

T7RNA聚合�是一条多胜链(singlepolypeptide)构成，只认识T7启动子不认得宿主启动子。

载体pETs是将T7特有的启动子切出插入适当的载体中，利用这个启动子来启动欲表达的基因。

至于T7RNA聚合�则是选殖入乳醣分解�基因启动子的后方，以λ噬菌体带入适当的宿主细胞内。

当我们在培养基中加入IPTG诱发T7RNA聚合�的大量制造时，大量的T7RNA聚合�就转而大量地转录我们欲表达的基因。

利用这种方式可以大量生产选殖在T7启动子后方的基因产物。

生产量竟然能达到大肠杆菌蛋白质总量的1/10呢！这种载体称为表达载体(expressionvectors)。

在生理学、遗传学及研究经验上，大肠杆菌及它的质粒和噬菌体都是我们最熟悉的。

分子生物学及基因选殖也是从大肠杆菌开始发迹。

基于这些原因，无论我们选殖动、植物基因或其它原核基因时，所考虑的第一个中间宿主总是大肠杆菌。

在我们已经完成大肠杆菌中的基因选殖、鉴定及定序等工作后，选殖的基因总要送回原来的生物细胞或生物体中才有意义。

然而绝大多数的大肠杆菌载体是无法在其它生物细胞中生存的。

为了克服这种困难，于是人们纷纷切下包括动、植物及其它各种原核生物的质粒复制原、病毒复制原、染色体复制原，甚至染色体的部分DNA，将之插入大肠杆菌载体中。

再配上其它适当的启动子，如此构筑成的载体不但可以用来转形大肠杆菌以外的细胞并且可以在这些细胞中做适当的基因表达。

这一类能穿梭于两种不同生物细胞之间的载体便称为穿梭载体(shuttlevectors)。

九、载体的适当利用载体的种类繁多，厂商能够提供的及研究室或研究个人能够提供不计其数。

当你需要利用载体时，你必须清楚你的目的。

载体与宿主的搭配也非常重要，必须了解它们的特性与基因标示才能得心应手的运用。

最后，也提供一些常用的质粒、载体与宿主来源：机构：ATCC：http://www.atcc.orgCABRI：http://www.cabri.orgCGSC/YaleUniversity：http://cgsc.biology.yale.eduDSMZ：http://www.dsmz.deNationalInstituteofGenetics/Japan：http://shigen.lab.nig.ac.jp食工所生物资源保存及研究中心：http://www.ccrc.firdi.org.tw/ch-home.htm厂商：Clontech：http://www.clontech.comFermentas：http://www.fermentas.comNewEnglandBiolabs：http://www.neb.comNovagen：http://www.novagen.comPromega：http://www.promega.comRoche：http://www.roche-applied-science.comStratagen：http://www.stratagene.com 超方便的实验干货查询工具 微信扫码进入「丁香实验」小程序 上一页 1 2 3 下一页 经验交流 彩虹伊伊WB9C 小树洞：你们工作后第一个月都得了多少工资呢？ 妇产专硕18年刚毕业，四证合一。

找了个市级三甲医院，合同的。

工作一个月，当时发工资，968元。

之前应聘的时候说前三月试用期1300元。

试用期过后加奖金，没想到，呵呵，租房一月1000元。

今天直接崩溃。

打算明天打电话问财务扣的都是什么钱，了解清楚后闪人。

回家继承祖业—烤地瓜，烤玉米走起。

你们工作后第一个月都得多少工资呢？   16 评论 qidi0126 抗体保存 用奶粉或者BSA配好的一抗/二抗可以在—20度保存多久？大约几个星期还是一两个月？   7 评论 我是金博士 DNA提取有杂带 PCR产物用试剂盒回收的时候，发现有杂带？有哪些办法可以提取得更干净？   5 评论 感兴趣的产品 载体质粒 10kb质粒载体 载体质粒扩增 质粒载体构建 质粒载体 质粒载体t载体 质粒载体比天然质粒 质粒载体5kb 质粒载体列表 酶切质粒载体 t载体质粒图谱 质粒载体克隆 感兴趣的厂家 载体质粒厂家 10kb质粒载体厂家 载体质粒扩增厂家 质粒载体构建厂家 质粒载体厂家 质粒载体t载体厂家 质粒载体比天然质粒厂家 质粒载体5kb厂家 质粒载体列表厂家 酶切质粒载体厂家 t载体质粒图谱厂家 质粒载体克隆厂家 版权声明 本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。

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