质粒与载体- 实验方法- 丁香通

一、质粒 绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。

... 原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。

其中质... 丁香通 丁香园 论坛 丁香客 医药招聘 丁香医生 更多 会议 调查派 用药助手 丁当铺 丁香搜索 医药数据库 丁香诊所 来问医生 我要登录 | 免费注册 | 我的丁香通 卖家： 成为卖家 更多合作 买家： 买家中心 移动端 发布求购 用户服务 产品 实验 品牌 搜索 搜产品 搜产品 搜实验 搜品牌 大家都在搜 搜索 发布求购 全部产品分类 首页 丁香实验new 促销 试用中心 学术专区 资讯 品牌学堂 丁香学社 试剂 🔥研选正品-丁香通研选> 生化试剂 化学试剂 生物化学 检验试剂 蛋白质类 蛋白质/抗原/多肽 蛋白检测 蛋白分析 蛋白纯化 蛋白修饰 标准品/对照品 酶 核酸类 核酸/蛋白合成 核酸分析 核酸检测 核酸纯化 DNA/RNA cDNA及合成纯化 RNAi技术 PCR/RT-PCR 分子类 文库及构建 克隆与表达 表达分析 细胞生物学检测 免疫检测 药物/生物类 药物筛选 动物/植物 微生物 饲料类 造模饲料 抗体 🔥研选正品-丁香通研选> 一抗 一抗 WB二抗 westernblot二抗 免疫组化抗体 免疫组化二抗 磷酸化抗体 磷酸化特异抗体 激酶和磷酸化抗体 亚型对照抗体 裂解液对照 组织对照 其他抗体 蛋白A，GPLUS 肿瘤抑制/凋亡抗体 信号分子抗体 结构蛋白抗体 抗体纯化 试剂盒 western 免疫组化试剂盒 放射免疫试剂盒 流式细胞试剂盒 细胞库/细胞培养 🔥研选正品-丁香通研选> 细胞库 普通细胞 原代细胞 ATCC细胞 干细胞 细胞株 细胞培养 细胞扩增 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞培养添加物 培养基/琼脂混合物 细胞因子、趋化因子和生长因子 琼脂 胰酶中和液 蛋白胨 多聚赖氨酸 氨基酸混合物 盐溶液 细胞分散试剂 消泡剂 细胞检测 细菌检测 支原体检测 支原体消除 细胞繁殖检测 导向毒素 ELISA试剂盒 🔥研选正品-丁香通研选> 动物ELISA试剂盒 人ELISA试剂盒 小鼠ELISA试剂盒 大鼠ELISA试剂盒 兔ELISA试剂盒 猪ELISA试剂盒 细胞ELISA试剂盒 细胞因子 细胞调亡 疾病检测ELISA试剂盒 心肌梗塞检测 内分泌检测 血栓与止血 肝纤维化检测 自身免疫检测 优生优育检测 传染病检测 其它 肿瘤标志物检测 激素 骨代谢 特种蛋白检测 活性多肽 其它 技术服务 分子生物学 DNA测序 DNA提取/纯化 RT-PCR服务 RNAi全套服务 分子生物学 载体构建 分子生物学整体服务 细胞生物学 细胞培养 流式细胞检测 细胞毒性测试 细胞生物学 干细胞服务 细胞因子生物检测 蛋白质相关 蛋白质组综合服务 蛋白制备 质谱服务 蛋白质相关 NMR分析 免疫学 抗体制备 抗体纯化 抗体标记 免疫组化/免疫沉淀/Western 免疫学 生物信息学 生物信息学服务 生物信息学 其他 生物芯片 生物芯片制备 蛋白芯片服务 组织芯片服务 生物芯片 微生物学 微生物鉴定 抑菌作用测试 内毒素测试 微生物学 发酵服务 病理学 病理学服务 组织学服务 病理学 动物实验 转基因动物定制 动物进出口 基因敲除 动物实验 实验整体外包 CRO综合服务 实验室定制服务 实验整体外包 耗材 🔥研选正品-丁香通研选> 常用耗材 吸头 瓶 管 微孔板 过滤 培养 PCR耗材 PCR管 PCR条板 PCR板 实时定量PCR毛细管 分子类 分子生物学膜 色谱相关 色谱柱 色谱介质 色谱配件/耗材 光谱配件/耗材 实验类 仪器配套 常用耗材 生物芯片 个人防护 手套 口罩 实验室用服 鞋帽 书籍/软件 软件 序列分析 流式分析 结构分析 图象分析 实验分析 生物芯片 凝胶分析 实验室信息化管理 仪器设备 统计 医学科研 文本分析 医用软件 网站建设及服务器 临床基础 内科学 外科学 书籍 临床医学 基础医学 药学书籍 生物医学 医学外语 医学考试 原版书 其它 生物医学 普通生物学 细胞生物学 遗传学 生理学 生物化学 生物物理学 分子生物学 生物工程学 微生物学 基础医学 医用一般科学 人体形态学 人体生理学 病理学 医学免疫学 医学遗传学 心理学 实验室仪器/设备 🔥研选正品-丁香通研选> 分析类仪器 色谱 质谱 光谱 同位素分析 测读系统 物理特性测定 显微镜 影像系统 显微镜 实验室常规 常用设备 移液器 低温制冷 清洗消毒 天平 核酸提取纯化 实验设备 基因蛋白组 环境检测 生物芯片 细胞分析 生化/细胞培养 组织学设备 电化学 分子生物学 动物实验仪器 神经生物学 医药设备 制药设备 药物检测 临床检验设备 免疫分析系统 尿液分析系统 血气分析系统 血液分析系统 生化分析系统 临床检验设备 实验室自动化 核酸提取纯化 蛋白纯化系统 全自动分液系统 全自动血液采样系统 论文服务 🔥研选正品-丁香通研选> 写作润色 专业翻译 论文写作 论文润色 课题研究 课题设计 课题申报 标书咨询 文章投稿 论文投稿 期刊选定 其他 原辅料包材 🔥研选正品-丁香通研选> 原料药 呼吸系统类 消化系统类 循环系统类 血液系统类 神经系统类 解热镇痛类 辅料 崩解剂 润滑剂 赋形剂 增塑剂 中间体 酸类 羧酸 羧酸盐 醇类 酮类 醛类 包材 输液包材 药用瓶 药用胶塞 肠溶材料 包衣材料 医疗器械 🔥研选正品-丁香通研选> 外科手术器械 基础外科手术器械 显微外科手术器械 神经外科手术器械 眼耳鼻喉科手术器械 胸腔心血管外科手术器械 腹部盆腔外科手术器械 矫形外科手术器械 妇产科及计划生育手术器械 烧伤整形手术器械 口腔科手术器械及设备材料 基本设备 普通诊察器械 手术室、急救室、诊疗室设备及器具 医用卫生材料及敷料 消毒和灭菌设备及器具 检验设备 医用电子仪器设备 医用光学器具仪器及内窥镜 医用超声激光仪器设备 医用高频及物理治疗仪器设备 中医器械 临床检验分析仪器 医用化验和基础设备器具 体外循环及血液处理设备 医用影像放射设备 其他 植入材料和人工器官 病房护理设备及器具 输液和穿刺设备 其他设备 体外诊断 🔥研选正品-丁香通研选> 生化诊断 生化诊断 免疫诊断 放射免疫 酶联免疫 胶体金 荧光免疫 化学发光 免疫印迹 免疫诊断 分子诊断 PCR 原位杂交 基因芯片 基因测序 分子诊断 微生物诊断 药敏试验 培养与形态观察 全自动微生物分解系统 微生物诊断 POCT 血糖监测类 心血管类 炎症类 凝血类 妊娠类 POCT 基因检测 基因检测 ICL-第三方医学检验 ICL-第三方医学检验 其他 临床生化检验试剂 其他试剂 首页 实验方法 DNA实验技术 DNA基础知识 DNA标记 质粒与载体 质粒与载体 质粒与载体 关键词： 质粒 载体 来源： 互联网 13363阅读 质粒与载体有问题？丁香实验库全新大升级，10000+实验方法任你选 前往丁香实验 一、质粒绝大多数的生物都是以DNA的形式来储藏其遗传信息。

遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori,originofreplication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。

含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phagegenome)等三类。

其中质粒的基因体和原核染色体类似，是由双绞炼DNA构成，并以超卷曲的形式存在。

它们的基因体约由2,000至150,000个碱基对组成，绝大多数呈环状，但也有极少数是线状构造(如Borreliaburgdorfferi)。

事实上你可以把它们视为比较小的原核染色体。

在自然环境中它们相当普遍地生存在原核生物细胞内，并和其宿主的许多特殊功能有关，诸如：赤贺氏杆菌(Shigella)的抗药、根瘤菌(Rhizobium)的固氮、农杆菌(Agrobacterium)的引瘤及假单胞杆菌(Pseudomonas)对环状有机物的分解等等。

以下我们谈的以细菌性质粒为主，尤其是革兰氏阴性菌的质粒。

二、质粒的类型当我们谈到质粒的类型时，就要看你从哪个角度来看它们，譬如说抗药性、结合生殖能力、宿主范围及DNA复制方式等等。

这些分型标准之间并无横向关联。

你无法说能结合生殖的质粒一定抗药或不抗药，也无法确定宿主范围和质粒套数的调控有何关联。

我们用到这些名词时，只是对特定质粒的性状做一些描述而已。

质粒的真正系统分类标准并非靠些性状，而是依据它们的不共容性(incompatibility)。

有的质粒带有显著特征可供我们侦测它们的存在，无已知特征的质粒称为隐性质粒(crypticplasmids)；有特征者称为显性质粒(acrypticplasmids)；带有抗药基因的天然质粒称为R-质粒(R-plasmids)。

有些质粒能在多种不同菌属细胞中生存，我们称它们为泛宿主性质粒(broad-host-rangeplasmids)；有一些质粒只能在少数相关宿主中生存，我们称它们为狭宿主性质粒(narrow-host-rangeplasmids)。

具有结合生殖(conjugation)能力的质粒为结合质粒(conjugativeplasmids)；没有这种能力的质粒便是非结合质粒(non-conjugativeplasmids)。

其它如侵袭性质粒(virulenceplasmid)、共生质粒(symbioticplasmids)及巨型质粒(megaplasmids)等等有关质粒性状叙述的名词不一而足。

三、质粒的复制环状质粒的复制形式主要分theta(θ)及rollingcircle两种。

基因体的复制都是由复制原开始。

原核性复制原约由250个碱基对组成，一般质粒的复制原常称为oriV(originofvegetativereplication)；有时R-质粒的复制原称为oriR；大肠杆菌的复制原称为oriC。

Theta形式的质粒复制与细菌基因体复制一样，以RNA聚合�(RNApolymerase)在复制原制造RNA引子(RNAprimer)，然后由DNA聚合�(DNApolymerase)接手由此向两个方向分别复制DNA，直到整个基因体复制完成。

在复制过程中当然还有许多其它酵素的参与，这些酵素多由宿主提供。

有的质粒自己携带一些与复制有关的基因，这些基因多被命名为rep，如repA、repB等等。

Rollingcircle形式的质粒复制与部分噬菌体基因体的复制相似。

环状双绞链中的一股在复制原附近被酵素切开，然后环状股与线状股被分别复制完成。

至于线状质粒的复制则是靠特殊的RNA引子或该质粒所具有的telomere-likesequence。

四、质粒的套数与套数调控(copynumbercontrol)在一个宿主细胞中某一特定质粒出现的个数称为套数(copynumber)。

在大肠杆菌中，质粒的套数由F-质粒(fertilityplasmid)的一个到pUCs的数百个不等。

质粒套数的控制与该质粒复制的调控机制有关，几乎每一种质粒都有它独特之处。

有关质粒套数的控制我们仅以两种代表型机制来说明。

1.反意RNA(antisenseRNA)：ColE1质粒的复制是由RNA聚合�由其复制原(oriV)前方555个碱基对以前的启动子(promoter)读出一段称为RNAII的产物。

这个称为前引子(preprimer)的RNAII会利用碱基配对而自我折迭成可被RNAaseH(一种特殊的RNA水解�)裁剪的立体结构。

RNAII经适当的裁剪后就形成正确的复制引子，复制于焉开始。

在ColE1质粒复制原前方445个碱基对的后方另有一个反向的启动子。

RNA聚合�由此处转录出一条称为RNAI的产物，它与RNAII反向，刚好形成配对，这种RNA称为反意RNA(antisenseRNA)。

当RNAI和RNAII形成RNA-RNA杂合体(RNA-RNAhybrid)时，RNAII无法形成可被RNAaseH剪裁的结构，复制引子无法产生，复制也不会有效地开始。

当然，实际上还有许多辅助蛋白和酵素会控制RNAI和RNAII之间的亲合力和RNAI的水解速度。

RNAI和RNAII的相对数量的增减决定了ColE1质粒的复制速度，也决定了该质粒的套数。

2.Iterons与repA：质粒pSC101的复制除了需要宿主供应的酵素外尚需要RepA蛋白。

RepA是pSC101的基因产物，在功能上他扮演了复制的活化因子(activator)与自我抑制因子(autorepressor)。

RepA基因位于pSC101复制原的前方，其转录方向和pSC101复制方向正好相反。

在RepA基因的启动子和pSC101复制原中有好几个顺向和反向的重复DNA短段，长约18~22个碱基对，称为iteron(s)。

RepA会粘黏在iteron上。

质粒在低浓度(低套数)时，产生低浓度的RepA促进了质粒的复制；质粒在高浓度(高套数)时，产生大量的RepA粘黏在复制原和RepA基因的启动子上抑制质粒的复制。

于是，RepA和iterons的相互作用决定了pSC101的套数。

五、质粒的不共容性(incompatibility)有时我们会想知道一个细菌细胞中会同时出现多少种质粒呢(种类非个数，个数是指套数)？这个问题倒没有一个确切的答案。

由自然环境分离的细菌细胞中含有一至三种质粒是常见的，有时多至七、八种也不令人意外。

质粒的种类虽多，但并非所有的质粒都能同时在同一个宿主细胞中生存。

有一些质粒在同一个宿主细胞中会发生相互排斥的现象，我们称这种现象为质粒的不共容性(incompatibility)。

质粒的不共容与他们的复制机制与套数调控有关。

当两种复制与套数调控机制毫不相干的质粒在同一个细胞中生存时，它们各自复制再各自分配到不同的子细胞中，不会发生干扰。

当两种复制机制与套数调控相关或甚至相同的质粒在同一个细胞中生存时，复制与套数调控机制就会把它们看做同一种质粒而将他们的套数控制在一定的数目内。

因为细胞分裂时质粒在子细胞中分配不均匀的缘故，经过几十次的细胞分裂后你只可能在特定的子细胞中找到其中一种质粒。

根据这种不共容性，质粒被分为许多不共容群(incompatibilitygroup，简称为inc)，譬如RP4属于incP；RSF1010属于incQ而pSa属于incW等。

如果你在实验中发现有一种质粒竟然属于两个不同的不共容群或有不共容不完全的现象。

别惊慌！那是有可能发生的。

在革兰氏阴性菌中，大肠杆菌与假单胞杆菌的质粒分类是做的比较清楚的。

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