番茄MYB14轉錄因子之抗逆境研究__臺灣博碩士論文知識加值 ...
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植物為了面對多樣環境條件,發展出複雜的生理和分子調控機制,以適應或克服可能遭遇的非生物性或生物性逆境。
在複雜的逆境防禦調控網絡中,有多種轉錄因子參與, ...
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植物為了面對多樣環境條件,發展出複雜的生理和分子調控機制,以適應或克服可能遭遇的非生物性或生物性逆境。
在複雜的逆境防禦調控網絡中,有多種轉錄因子參與,其中包括AP2/ERF、MYB等轉錄因子家族。
已知部分AP2/ERF或MYB轉錄因子除了參與植物激素相關訊息傳遞以影響植物生長發育外,亦參與了抗病及抗逆境等生理調控機制。
本實驗室先前的研究利用晶片分析耐旱、耐高鹽之SlERF.D2過表現轉殖番茄,結果發現SlMYB14在轉殖株中有較高的表現量。
序列分析結果顯示SlMYB14與阿拉伯芥AtMYB14具高相似性,在阿拉伯芥中,AtMYB14參與冷逆境耐受性調控,同源轉錄因子AtMYB15可調控乾旱逆境耐受以及創傷修復機制;相關研究中,葡萄VvMYB14則參與植物抗菌素Stilbene之生合成路徑。
蛋白質結構分析結果指出,SlMYB14含有MYB特有之R2及R3胺基酸序列重複,屬於R2R3-MYB亞族轉錄因子。
啟動子序列分析結果中,SlMYB14啟動子上具四個能被AP2/ERF轉錄因子所辨認的LTRE,可能參與調控冷逆境耐受性,以及兩個與ABA訊息調控相關,可被AREB辨識調節的ABRE序列片段。
本研究藉由比較野生型和轉殖番茄在各種逆境相關試驗下之分子及生理表現,以分析SlMYB14所參與之逆境生理調控,結果發現,SlMYB14的表現受到低溫、高溫、高鹽、高滲逆境及甲基茉莉酸之誘導;茉莉酸反應相關基因JAZ7表現隨SlMYB14過表現而上調;利用VIGS將SlMYB14基因表現減弱後使番茄對缺水逆境耐受性下降,顯示SlMYB14受茉莉酸訊息傳遞路徑調控而參與逆境之抗性機制。
Toovercomedifferentenvironmentalconditions,plantwouldinducecomplexphysiologyandmolecularresponse.SomeAP2/ERFandMYBtranscriptionfactors(TFs)playrolesinregulationofplantdevelopment,metabolismandresponsestobiotic/abioticstress.Inourpreviousstudy,tomato(Solanumlycopersicum)microarraydatashowedthatSlMYB14wasup-regulatedinanSlERF.D2overexpressiontransgenictomato,whichtoleratestodrought,salinitystress.PreviousreportshaveshownthatMYB14involvesinclodtoleranceinArabidopsis,andregulatesstilbenebiosynthesisingrape.ThepredictedstructureofSlMYB14showsaMYB-bindingdomainwithR2andR3MYBrepeats.SlMYB14isaR2R3-MYBTFs.InsilicoanalysisindicatesfourLTREsitesinthepromoterregion,whichcouldbeboundandregulatedbyAP2/ERFTFsdirectly,andtwoABREsites,whichrelatedtoABAsignaltransduction.TodemonstratetheexpressionpatternofSlMYB14,temporalexpressionunderstresswasconfirmedbyRT-qPCR.SlMYB14canbeinducedbycold,heat,salinityandosmoticstress,aswellasthetreatmentofmethyljasmonate.JasmonatesignaltransductionrelatedgeneJAZ7isup-regulatedinSlMYB14overexpressiontransgenictomato.GeneknockdownofSlMYB14decreasesdroughttoleranceoftomato.TheresultsindicatethatSlMYB14involvesinjasmonatesignaltransductionpathway,andrespondstoabioticstress.
摘要ⅤAbstractⅥ壹、緒論1一、植物逆境與抗逆境研究1二、植物抗逆境訊息傳遞3三、植物轉錄因子6四、番茄SlMYB14轉錄因子7五、研究目的8貳、材料與方法91.菌種及植物92.菌株培養及保存93.純化質體DNA104.質體構築115.電穿孔轉型126.PCR及膠體電泳147.阿拉伯芥花序浸漬法轉殖158.阿拉伯芥轉殖株逆境試驗179.番茄農桿菌法轉殖1710.番茄逆境試驗2011.純化植株RNA2112.反轉錄PCR(ReverseTranscription-PCR)2213.基因表現量測定2314.番茄原生質體內蛋白質位置分析(SubcellularLocalization)2315.病毒誘導基因靜默(Virus-InducedGeneSilencing)2416.葉綠素螢光活性測定2617.啟動子活性分析2618.組織染色2619.序列及數據分析2720.統計分析28參、結果29一、SlMYB14表現量受SlERF.D2過表現而上調29二、SlMYB14屬於R2R3-MYB轉錄因子29三、SlMYB14啟動子含LTRE和ABRE29四、SlMYB14未影響相關阿拉伯芥轉殖株之生長發育30五、SlMYB14於植株各組織部位之表現情形30六、SlMYB14表現量受低溫、高溫、高鹽、高滲逆境試驗而上調31七、番茄SlMYB14基因減弱後對缺水逆境耐受性下降31八、番茄噴灑植物激素後相關基因表現量分析32九、SlMYB14過表現番茄轉殖株內相關基因表現量分析32十、SlMYB14啟動子活性於菸草內未受SlERF.D2調控32肆、討論34伍、參考文獻39
AgarwalM,HaoY,KapoorAetal.(2006)AR2R3typeMYBtranscriptionfactorisinvolvedinthecoldregulationofCBFgenesandinacquiredfreezingtolerance.TheJournalofBiologicalChemistry281:37636-37645AhmadP,RasoolS,GulAetal.(2016)Jasmonates:multifunctionalrolesinstresstolerance.FrontiersinPlantScience7:813AmbawatS,SharmaP,YadavNRetal.(2013)MYBtranscriptionfactorgenesasregulatorsforplantresponses:anoverview.PhysiologyandMolecularBiologyofPlants19:307-321AmentK,KrasikovV,AllmannSetal.(2010)Methylsalicylateproductionintomatoaffectsbioticinteractions.ThePlantJournal62:124-134BoradV,SriramS(2008)Pathogenesis-relatedproteinsfortheplantprotection.AsianJournalofExperimentalSciences22:189-196CasarettoJA,El-KereamyA,ZengBetal.(2016)ExpressionofOsMYB55inmaizeactivatesstress-responsivegenesandenhancesheatanddroughttolerance.BMCGenomics17:312ChenY,ChenZ,KangJetal.(2013)AtMYB14regulatescoldtoleranceinArabidopsis.PlantMolecularBiologyReporter31:87-97ChenY,ZhangX,WuWetal.(2006)Overexpressionofthewounding-responsivegeneAtMYB15activatestheshikimatepathwayinArabidopsis.JournalofIntegrativePlantBiology48:1084-1095ChowCN,ZhengHQ,WuNYetal.(2016)PlantPAN2.0:anupdateofplantpromoteranalysisnavigatorforreconstructingtranscriptionalregulatorynetworksinplants.NucleicAcidsResearch44:D1154-1160DingZ,LiS,AnXetal.(2009)TransgenicexpressionofMYB15confersenhancedsensitivitytoabscisicacidandimproveddroughttoleranceinArabidopsisthaliana.JournalofGeneticsandGenomics36:17-29DuanD,FischerS,MerzPetal.(2016)AnancestralalleleofgrapevinetranscriptionfactorMYB14promotesplantdefence.JournalofExperimentalBotany67:1795-1804DubosC,StrackeR,GrotewoldEetal.(2010)MYBtranscriptionfactorsinArabidopsis.TrendsinPlantScience15:573-581DuM,ZhaoJ,TzengDTWetal.(2017)MYC2orchestratesahierarchicaltranscriptionalcascadethatregulatesjasmonate-mediatedplantimmunityintomato.ThePlantCell29:1883-1906FangL,HouY,WangLetal.(2014)Myb14,adirectactivatorofSTS,isassociatedwithresveratrolcontentvariationinberryskinintwograpecultivars.PlantCellReports33:1629-1640GibbsDJ,VossU,HardingSAetal.(2014)AtMYB93isanovelnegativeregulatoroflateralrootdevelopmentinArabidopsis.TheNewPhytologist203:1194-1207HigoK,UgawaY,IwamotoMetal.(1999)Plantcis-actingregulatoryDNAelements(PLACE)database:1999.NucleicAcidsResearch27:297-300HöllJ,VannozziA,CzemmelSetal.(2013)TheR2R3-MYBtranscriptionfactorsMYB14andMYB15regulatestilbenebiosynthesisinVitisvinifera.ThePlantCell25:4135-4149IshigaY,IshigaT,UppalapatiSRetal.(2013)JasmonateZIM-domain(JAZ)proteinregulateshostandnonhostpathogen-inducedcelldeathintomatoandNicotianabenthamiana.PLOSONE8:e75728KissoudisC,SeifiA,YanZetal.(2016)Ethyleneandabscisicacidsignalingpathwaysdifferentiallyinfluencetomatoresistancetocombinedpowderymildewandsaltstress.FrontiersinPlantScience7:2009LeydonAR,BealeKM,WoronieckaKetal.(2013)ThreeMYBtranscriptionfactorscontrolpollentubedifferentiationrequiredforspermrelease.CurrentBiology23:1209-1214LiCW,SuRC,ChengCPetal.(2011)TomatoRAVtranscriptionfactorisapivotalmodulatorinvolvedintheAP2/EREBP-mediateddefensepathway.PlantPhysiology156:213-227LiZ,PengR,TianYetal.(2016)Genome-wideidentificationandanalysisoftheMYBtranscriptionfactorsuperfamilyinSolanumlycopersicum.PlantandCellPhysiology57:1657-1677LiangG,HeH,LiYetal.(2014)MYB82functionsinregulationoftrichomedevelopmentinArabidopsis.JournalofExperimentalBotany65:3215-3223LibermanLM,SparksEE,Moreno-RisuenoMAetal.(2015)MYB36regulatesthetransitionfromproliferationtodifferentiationintheArabidopsisroot.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica112:12099-12104LoonLCv,RepM,PieterseCMJ(2006)Significanceofinducibledefense-relatedproteinsininfectedplants.AnnualReviewofPhytopathology44:135-162MittlerR,FinkaA,GoloubinoffP(2012)Howdoplantsfeeltheheat?TrendsinBiochemicalSciences37:118-125NakanoT,SuzukiK,FujimuraTetal.(2006)Genome-wideanalysisoftheERFgenefamilyinArabidopsisandrice.PlantPhysiology140:411-432OsakabeY,Yamaguchi-ShinozakiK,ShinozakiKetal.(2014)ABAcontrolofplantmacroelementmembranetransportsystemsinresponsetowaterdeficitandhighsalinity.NewPhytologist202:35-49PareekA,KhuranaA,SharmaAKetal.(2017)AnoverviewofsignalingregulonsduringcoldStresstoleranceinplants.CurrentGenomics18:498-511ParkSW,KaimoyoE,KumarDetal.(2007)Methylsalicylateisacriticalmobilesignalforplantsystemicacquiredresistance.Science318:113-116PauwelsL,GoossensA(2011)TheJAZproteins:acrucialinterfaceinthejasmonatesignalingcascade.ThePlantCell23:3089-3100PieterseCM,VanderDoesD,ZamioudisCetal.(2012)Hormonalmodulationofplantimmunity.AnnualReviewofCellandDevelopmentalBiology28:489-521PirrelloJ,PrasadBN,ZhangWetal.(2012)Functionalanalysisandbindingaffinityoftomatoethyleneresponsefactorsprovideinsightonthemolecularbasesofplantdifferentialresponsestoethylene.BMCPlantBiology12:190RaoX,HuangX,ZhouZetal.(2013)Animprovementofthe2ˆ(-deltadeltaCT)methodforquantitativereal-timepolymerasechainreactiondataanalysis.Biostatistics,BioinformaticsandBiomathematics3:71-85RasoolS,SinghS,HasanuzzamanMetal.(2014)Chapter4-PlantResistanceunderColdStress:Metabolomic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