博碩士論文行動網

研究生: 柯泰名. 研究生(外文):, Tai-Ming ko. 論文名稱: 發展胞內ErbB-2/neu之DNA疫苗以改善基因療法對於膀胱癌之治療. 論文名稱(外文):, Development of DNA ... 資料載入處理中... 跳到主要內容 臺灣博碩士論文加值系統 ::: 網站導覽| 首頁| 關於本站| 聯絡我們| 國圖首頁| 常見問題| 操作說明 English |FB專頁 |Mobile 免費會員 登入| 註冊 功能切換導覽列 (188.166.176.73)您好！臺灣時間：2022/06/1704:33 字體大小：       ::: 詳目顯示 recordfocus 第1筆/ 共1筆  /1頁 論文基本資料 摘要 外文摘要 目次 參考文獻 電子全文 紙本論文 論文連結 QRCode 本論文永久網址: 複製永久網址Twitter研究生:柯泰名研究生(外文):Tai-Mingko論文名稱:發展胞內ErbB-2/neu之DNA疫苗以改善基因療法對於膀胱癌之治療論文名稱(外文):DevelopmentofDNAvaccines:CytoplasmicErbB-2/neuforBladderCancerGeneTherapy指導教授:賴明德指導教授(外文):Ming-DergLai學位類別:碩士校院名稱:國立成功大學系所名稱:生物化學研究所學門:生命科學學門學類:生物化學學類論文種類:學術論文論文出版年:2003畢業學年度:91語文別:中文論文頁數:96中文關鍵詞:DNA疫苗、調節T細胞、抗原、膀胱癌外文關鍵詞:DNAvaccine、regulatoryTcell、neu、antigen、CD4+CD25+Tcell、bladdercancer相關次數: 被引用:0點閱:166評分:下載:22書目收藏:0 摘要理想型的DNA疫苗設計是能夠誘導適合該抗原的免疫反應。

在傳統免疫學的研究上，抗原在細胞中呈現的位置常會決定免疫反應的走向。

在細胞外所呈現的抗原主要被體液型免疫反應所清除，細胞內的抗原主要被細胞型免疫反應所清除。

基於此原則，若將分泌型的DNA疫苗表現在細胞內部也許會增加其細胞免疫反應以提高DNA疫苗的效用。

故比較分泌型和在細胞內部表現的DNA疫苗對於研究理想型DNA疫苗設計會是一個可行的研究方式。

於是，我們實驗室便構築了表現在細胞外部和內部的N’-neu及C’-neu(Sec-N’-neu,Cyt-N’-neu,Sec-C’-neu,Cyt-C’-neu)，利用這四種DNA疫苗觀察來深入探討這個發展DNA疫苗的新議題。

在腫瘤大小測量及生存曲線中的結果發現，這四種DNA疫苗都有顯著的效果，並且抗原在細胞內部呈現的DNA疫苗治療效果會比抗原在細胞外部呈現更佳。

我們利用西方點漬法偵測小鼠中是否含有anti-neu的抗體，結果發現只有在分泌型的DNA疫苗組別中才有抗體的產生。

於是，利用免疫組織染色觀察所引起的免疫反應，發現抗原呈現在細胞內部的DNA疫苗會使較多的CD8的淋巴球滲入，但抗原呈現在細胞外部的DNA疫苗卻是使較多的CD4淋巴球滲入。

更進一步在動物體內分別去除不同的免疫球細胞群，發現在去除CD8淋巴球時，各組都有顯著的影響，這顯示CD8淋巴球在各組DNA疫苗的療效都扮演了重要的角色。

而在去除CD4的免疫細胞群時，我們發現只有抗原在細胞內部的DNA疫苗的療效有降低，但對於抗原在細胞外部的DNA疫苗卻反而還有增加療效的現象。

由於CD4淋巴球中含有會抑制免疫反應的調節T細胞(CD4+CD25+T細胞)，所以我們認為分泌型的DNA疫苗也許和調節T細胞有關。

於是，我們便分析施打疫苗後的小鼠其CD4+CD25+T細胞數量。

結果發現，分泌型DNA疫苗的調節T細胞在數量上有上升的情形，而這樣的情形在抗原表現在細胞內部的組別並未發生。

由以上結果我們可以確認：在細胞內部表現的DNA疫苗比分泌型的DNA還要好，而我們認為這可能和分泌型的DNA疫苗會活化調節T細胞有關。

AbstractTheultimateobjectiveofrationalDNAvaccinedesignistheinductionofpathogen-appropriateimmunity.WewantedtofindarationalDNAvaccinedesigntomodifysecretiveformN’-neuDNAvaccineforincreasingitstherapeuticefficacyorloweringitssideeffect.TheinitialcellulareventsandinteractionsthatoccurfollowingDNAimmunizationarelikelytobekeytodeterminingthecharacterandmagnitudeoftheresultingimmuneresponse.Therefore,thecomparisonofsecretiveformDNAvaccineandcytoplasmicDNAvaccineisapracticableapproachforstudyingrationalDNAvaccinedesign.Then,weconstructedcytoplasmicN’-neu,secretiveC’-neu,andcytoplasmicC’-neuDNAvaccineforstudyingthisissue.Inourresults,wefoundthatalloftheseneuDNAvaccineshadthetherapeuticefficacyinthisanimalmodelbasedonthetumorvolumemeasurementandthesurvivalcurve,andthecytoplasmicDNAvaccinesevenhadbettertherapeuticefficacythansecretiveform.Wealsodetectedtheanti-neuantibodyinserumofthemicetreatedwithsecretiveformDNAvaccine.TheimmunohistochemistrystudiesshowedthatthesignificantinfiltrationofCD4+TcellsandCD8+TcellsintotumorswerefoundinthemicethatweretreatedwithalloftheseDNAvaccinetherapies.AndwefoundthatthenumbersoftheCD4+TcellsactivatedbysecretiveformDNAvaccinesaremorethanbycytoplasmicDNAvaccines.Incontrast,thenumbersoftheCD8+TcellsactivatedbysecretiveformDNAvaccinesarefewerthanbycytoplasmicDNAvaccine.Further,wewantedtoinvestigatetheroleoftheCD4+TcellsandCD8+TcellsbydepletionAbfromhybridoma.TheresultsshowedthatwhenwedepletedCD8+Tcells,thetherapeuticefficacyoftheDNAvaccinesislost.Therefore,CD8+TcellplayedanessentialroleinalloftheseDNAvaccinetherapies.ButwhenwedepletedCD4+Tcells,wefoundthatthetherapeuticefficacyofsecretiveformDNAvaccineandcytoplasmicDNAvaccinearedifferent.CombinationofsecretiveformDNAvaccinesandtheantibodyfordepletionCD4+Tcellsevenincreasesthetherapeuticefficacy.TheseresultsmaybecorrelatedwiththenumberoftheCD4+CD25+Tcells.ThenweanalyzedthenumberoftheCD4+CD25+Tcellsinthelymphnode.TheresultsshowedthatthesecretiveformDNAvaccineincreasedthenumberoftheCD4+CD25+Tcells,butthecytoplasmicDNAvaccinedidn’t.Inconclusion,theresultsindicatedthatthecytoplasmicDNAvaccinehadbettertherapeuticefficacythanthesecretiveformdid.AndwesuggestedthatitmaybecorrelatedwiththeCD4+CD25+Tcells. 目錄摘要1目錄5圖目錄6緒論8材料與方法18結果54結論61討論62參考文獻69圖74自述96圖目錄圖一、本實驗所採用的四個neuDNA疫苗的構築片段74圖二、pRc/CMV-sec-N''-neu和pRc/CMV-cyt-N''-neu蛋白質的表現及其表現位置75圖三、pRc/CMV-sec-C''-neu和pRc/CMV-cyt-C''-neu蛋白質的表現及其表現位置76圖四、比較注射分泌型的DNA疫苗在老鼠血清內的anti-neu抗體77圖五、比較施打分泌型和在細胞內部表現的N端neu所產生的抗體量上的差異78圖六、注射DNA疫苗流程表79圖七、由腫瘤大小觀察DNA疫苗在小鼠中的治療效果80圖八、由生存曲線觀察DNA疫苗在小鼠中的治療效果81圖九、CD4免疫淋巴球在腫瘤組織滲入情形82圖十、CD8免疫淋巴球在腫瘤組織滲入情形83圖十一、比較分泌型的DNA疫苗Sec-N’-neu以及在細胞表現的Cyt-N’-neu的細胞激素84圖十二、DNA疫苗和去除T細胞的抗體注射流程圖85圖十三、以腫瘤大小觀察CD8免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-N’-neu和在細胞表現的Cyt-N’-neu的治療效果的影響86圖十四、以腫瘤大小觀察CD8免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-C’-neu和在細胞表現的Cyt-C’-neu的治療效果的影響87圖十五、以生存曲線觀察CD8免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-N’-neu和在細胞表現的Cyt-N’-neu的治療效果的影響88圖十六、以生存曲線觀察CD8免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-C’-neu和在細胞表現的Cyt-C’-neu的治療效果的影響89圖十七、以腫瘤大小觀察CD4免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-N’-neu和在細胞表現的Cyt-N’-neu的治療效果的影響90圖十八、以腫瘤大小觀察CD4免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-C’-neu和在細胞表現的Cyt-C’-neu的治療效果的影響91圖十九、以生存曲線觀察CD4免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-N’-neu和在細胞表現的Cyt-N’-neu的治療效果的影響92圖二十、以生存曲線觀察CD4免疫淋巴球對於分泌型的DNA疫苗Sec-C’-neu和在細胞表現的Cyt-C’-neu的治療效果的影響93圖二十一、分泌型DNA疫苗和在細胞表現的DNA疫苗對於調節T細胞數量的影響94圖二十二、在細胞內部表現的DNA疫苗引起的心臟病變95 參考文獻Alegre,M.L.,Noel,P.J.,Eisfelder,B.J.,Chuang,E.,Clark,M.R.,Reiner,S.L.,Thompson,C.B.RegulationofsurfaceandintracellularexpressionofCTLA4onmouseTcells.J.Immunol.157:4762-4770.1996.Cederbom,L.,H.Hall,F.Ivars.2000.CD4+CD25+regulatoryTcellsdown-regulateco-stimulatorymoleculesonantigen-presentingcells.Eur.J.Immunol.30:1538.2000.ChenSA,TsaiMH,WuFT,HsiangA,ChenYL,LeiHY,TzaiTS,LeungHW,JinYT,HsiehCL,HwangLH,LaiMD.InductionofantitumorimmunitywithcombinationofHER2/neuDNAvaccineandinterleukin2gene-modifiedtumorvaccine.ClinCancerRes.6:4381-8.2000.Chen,Y.,D.Hu,D.J.Eling,J.Robbins,T.J.Kipps.DNAvaccinesencodingfull-lengthortruncatedneuinduceprotectiveimmunityagainstneu-expressingmammarytumors.CancerRes.58:1965.1998.Christianson,T.A.,J.K.Doherty,Y.J.Lin,E.E.Ramsey,R.Holmes,E.J.Keenan,G.M.Clinton.NH2-terminallytruncatedHER-2/neuprotein:relationshipwithsheddingoftheextracellulardomainandwithprognosticfactorsinbreastcancer.CancerRes.58:5123.1998.Disis,M.,E.Calenoff,G.McLaughlin,A.E.Murphy,W.Chen,B.Groner,M.Jeschke,N.Lydon,E.McGlynn,R.B.Livingston.ExistentTcellandantibodyimmunitytoHer-2/neuproteininpatientswithbreastcancer.CancerRes.54:16.1994.Disis,M.L.,S.M.Pupa,J.R.Gralow,R.Dittadi,S.Menard,M.A.Cheever.High-titerHer-2/neuprotein-specificantibodycanbedetectedinpatientswithearly-stagebreastcancer.J.Clin.Oncol.15:3363.1997DonnellyJ.J.,UlmerJ.B.,ShiverJ.W.,MargaretA.L.DNAVaccines.Annu.Rev.Immunol.,15:617-648.1997.Ewer,M.S.,H.R.Gibbs,J.Swafford,R.S.Benjamin.CardiotoxicityinpatientsreceivingTrastuzumab(Herceptin):primarytoxicity,synergisticorsequentialstress,orsurveillanceartifact?.Semin.Oncol.26:(Suppl.12):96.1999.Feldman,J..Immunologicalenhancement:astudyofblockingantibodies.Adv.Immunol.15:167.1972.Fendly,B.M.,C.Kotts,W.L.T.Wong,I.Figari,W.Harel,L.Staib,M.E.Carver,D.Vetterlein,M.S.Mitchell,H.M.Shephard.Successfulimmunizationofrhesusmonkeyswiththeextracellulardomainofp185HER2:apotentialapproachtohumanbreastcancer.VaccineRes.2:129.1993.Garza,K.M.,S.M.Chan,R.Suri,L.T.Nguyen,B.Odermatt,S.P.Schoenberger,P.S.Ohashi.Roleofantigen-presentingcellsinmediatingtoleranceandautoimmunity.J.Exp.Med.191:2021.2000.Godfrey,V.,Wilkinson,J.,Rinchik,E.&Russell,L.Fatallymphoreticulardiseaseinthescurfy(sf)mouserequiresTcellsthatmatureinasfthymicenvironment:potentialmodelforthymiceducation.Proc.Natl.Acad.Sci.USA88,5528-5532.1991.Grant,E.P.,M.T.Michalek,A.L.Goldberg,K.L.Rock.Rateofantigendegradationbytheubiquitin-proteasomepathwayinfluencesMHCclassIpresentation.J.Immunol.155:3750.1995.Hurwitz,E.,I.Stancovski,M.Sela,Y.Yarden.SuppressionandpromotionoftumorgrowthbymonoclonalantibodiestoErbB-2differentiallycorrelatewithcellularuptake.Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:3353.1995.KhattriR,CoxT,YasaykoSA,RamsdellF.AnessentialroleforScurfininCD4+CD25+Tregulatorycells.NatImmunol.1:337-42.2003KhattriR,KasprowiczD,CoxT,MortrudM,ApplebyMW,BrunkowME,ZieglerSF,RamsdellF.TheamountofscurfinproteindeterminesperipheralTcellnumberandresponsiveness.JImmunol.167:6312-20.2001.Krummel,M.F.,Allison,J.P.CD28andCTLA-4haveopposingeffectsontheresponseofTcellstostimulation.J.Exp.Med.182:459-465.1995.Lofts,F.J.,W.J.Gullick.c-erbB2amplificationandoverexpressioninhumantumors.CancerTreat.Res.61:161.1992.MahnkeK,GuoM,LeeS.Thedendriticcellreceptorforendocytosis,DEC-205,canrecycleandenhanceantigenpresentationviamajorhistocompatibilitycomplexclassII-positivelysosomalcompartments.JCellBiol.151:673-684.2000.MahnkeK,QianY,KnopJ,EnkAH.InductionofCD4+/CD25+regulatoryTcellsbytargetingofantigenstoimmaturedendriticcells.Blood.101(12):4862-9.2003.Nishimura,T.,K.Iwakabe,M.Sekimoto,Y.Ohmi,T.Yahata,M.Nakui,T.Sato,S.Habu,H.Tashiro,M.Sato,A.Ohta.Distinctroleofantigen-specificThelpertype1(Th1)andTh2cellsintumoreradicationinvivo.J.Exp.Med.190:617.1999.Qin,Z.,G.Richter,T.Schuler,S.Ibe,X.Cao,T.Blankenstein.BcellsinhibitinductionofTcell-dependenttumorimmunity.Nat.Med.4:627.1998.Pegram,M.,D.Slamon.BiologicalrationaleforHER2/neu(c-erbB2)asatargetformonoclonalantibodytherapy.Oncology27:13.2001.Peoples,G.E.,P.S.Goedegebuure,R.Smith,D.C.Linehan,I.Yoshino,T.J.Eberlein.Breastandovariancancer-specificcytotoxicTlymphocytesrecognizethesameHer-2/neu-derivedpeptide.Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:432.1995.PiechockiMP,PilonSA,WeiWZ.ComplementaryAntitumorImmunityInducedbyPlasmidDNAEncodingSecretedandCytoplasmicHumanErbB-2.J.Immunol.167:3367-3374.2001.PiechockiMP,PilonSA,WeiWZ.Quantitativemeasurementofanti-ErbB-2antibodybyflowcytometryandELISA.JImmunolMethods.1;259(1-2):33-42.2002.PilonSA,PiechockiMP,WeiWZ.VaccinationwithcytoplasmicErbB-2DNAprotectsmicefrommammarytumorgrowthwithoutanti-ErbB-2antibody.JImmunol.15;167(6):3201-6.2001.Read,S.,V.Malmstrom,F.Powrie.CytotoxicTlymphocyte-associatedantigen4playsanessentialroleinthefunctionofCD25+CD4+regulatorycellsthatcontrolintestinalinflammation.J.Exp.Med.192:295.2000.RushC,MitchellT,GarsideP.EfficientprimingofCD4+andCD8+TcellsbyDNAvaccinationdependsonappropriatetargetingofsufficientlevelsofimmunologicallyrelevantantigentoappropriateprocessingpathways.J.Immunol.167:3367-3374.2002Rovero,S.,A.Amici,E.DiCarlo,R.Bei,P.Nanni,E.Quaglino,P.Porcedda,K.Boggio,A.Smorlesi,P.L.Lollini.InhibitionofcarcinogenesisbyDNAvaccination.J.Immunol.165:5133.2000.SeddonB,MasonD.PeripheralautoantigeninducesregulatoryTcellsthatpreventautoimmunity.JExpMed.189:877-882.1999.Shevach,E.M.CD4+CD25+suppressorTcells:morequestionsthananswers.Nat.Rev.Immunol.2,389-400.2002.SteitzJ,BruckJ,LenzJ,KnopJ,TutingT.DepletionofCD25(+)CD4(+)Tcellsandtreatmentwithtyrosinase-relatedprotein2-transduceddendriticcellsenhancetheinterferonalpha-induced,CD8(+)T-cell-dependentimmunedefenseofB16melanoma.CancerRes.61:8643-6.2001.Suri-Payer,E.,Amar,A.Z.,Thornton,A.M.,Shevach,E.M.CD4+CD25+TcellsinhibitboththeinductionandeffectorfunctionofautoreactiveTcellsandrepresentauniquelineageofimmunoregulatorycells.J.Immunol.160:1212-1218.1998.Takahashi,T.,Y.Kuniyasu,M.Toda,N.Sakaguchi,M.Itoh,M.Iwata,J.Shimizu,S.Sakaguchi.Immunologicself-tolerancemaintainedbyCD25+CD4+naturallyanergicandsuppressiveTcells:inductionofautoimmunediseasebybreakingtheiranergic/suppressivestate.Int.Immunol.10:1969.1998.ThorntonAM,ShevachEM.SuppressoreffectorfunctionofCD4+CD25+immunoregulatoryTcellsisantigennonspecific.JImmunol.164:183-190.2000.TigheH.,CorrM.,RomanM.,RazE.Genevaccination:plasmidDNAismorethanjustablueprint.Immunol.Today,19:89-97.1998.Toellner,K.,S.A.Luther,D.M.Sze,R.K.Choy,D.R.Taylor,I.C.M.MacLennan,H.Acha-Orbea.Thelper1(Th1)andTh2characteristicsstarttodevelopduringTcellprimingandareassociatedwithanimmediateabilitytoinduceimmunoglobulinclassswitching.J.Exp.Med.187:1193.1998.Tokuda,Y.,M.Ohta,Y.Suzuki,M.Kubota,T.Tajima.Clinicaldevelopmentoftrastuzumabinbreastcancer.BreastCancer8:93.2001.V.Renard,L.Sonderbye,K.Ebbehoj,P.B.Rasmussen,K.Gregorius,T.Gottschalk,S.Mouritsen,A.Gautam,andD.R.Leach.HER-2DNAandProteinVaccinesContainingPotentThCellEpitopesInduceDistinctProtectiveandTherapeuticAntitumorResponsesinHER-2TransgenicMice.J.Immunol.171:1588-1595.2003.Walker,R.A.,W.J.Gullick,J.M.Varley.Anevaluationofimmunoreactivityforc-erbB-2proteinasamarkerofpoorshort-termprognosisinbreastcancer.Br.J.Cancer60:426.1989.Wright,C.,B.Angus,S.Nicholson,J.R.Sainsbury,J.Cairns,W.J.Gullick,P.Kelly,A.L.Harris,C.H.Horne.Expressionofc-erbB-2oncoprotein:aprognosticindicatorinhumanbreastcancer.CancerRes.49:2087.1989.XingminZhang,LeonidIzikson,LimingLiuandHowardL.Weiner.ActivationofCD25+CD4+RegulatoryTCellsbyOralAntigenAdministration.J.Immunol.167:4245—4253.2001.Yu,D.,M.C.Hung.OverexpressionofErbB2incancerandErbB2-targetingstrategies.Oncogene19:6115.2001.蔡明寰.膀胱癌之(I)基因治療及(II)抗藥性之研究。

國立成功大學醫學院生物化學研究所碩士論文,2000。

http://www.doh.gov.tw/statistic/data/死因摘要/91年/表22.xls  電子全文  國圖紙本論文 連結至畢業學校之論文網頁點我開啟連結註:此連結為研究生畢業學校所提供，不一定有電子全文可供下載，若連結有誤，請點選上方之〝勘誤回報〞功能，我們會盡快修正，謝謝！ 推文 網路書籤 推薦 評分 引用網址 轉寄                                                                                                                                                                                                                    top 相關論文 相關期刊 熱門點閱論文 1. 膀胱癌之(I)基因治療及(II)抗藥性之研究 2. 膀胱癌之基因治療及分析致癌基因neu在膀胱癌細胞中特性之研究 3. 膀胱癌細胞株中酪胺酸激酵素之表現分析 4. 以低劑量環磷酰胺治療探討膀胱癌小鼠動物模式中調節性T細胞與自然殺手細胞之免疫調節反應 5. 膀胱癌之化學治療配合基因治療 6. 膀胱癌細胞中之致癌基因neu與藥物拮抗性之關係 7. 人類膀胱癌腫瘤抗原與單源抗體之研究   無相關期刊   1. 探討T細胞在嚴重藥物副作用中的致病角色:卡巴西平所引起史帝文生強生症候群的T細胞受器分子分析和功能性分析 2. ErbB-2訊息傳遞路徑經由PYK2/ACK1調控攝護腺癌細胞之雄性素非依賴性生長能力 3. CD4FOXP3T細胞與嚴重敗血症及敗血性休克病人預後之相關性 4. 含雙色胺酸功能區氧化還原酶在methotrexate治療鱗狀上皮細胞癌中所扮演之角色 5. 登革病毒非結構性蛋白1抗體造成血小板功能異常之探討 6. 發展ErbB-2DNA疫苗以改善基因療法對惡性腫瘤之治療 7. Jurkat細胞的介白素10號基因啟動子上之轉錄因子結合位調節介白素10號表現之研究 8. 製備具有凝血酶切點及活化型血小板結合能力之重組鏈激酶融合蛋白 9. 沙門氏腸炎桿菌致病因子之研究 10. 利用小片段干擾核苷酸引發之核苷酸干擾現象抑制腸病毒71型的感染 11. 人類血纖維蛋白溶脢原Kringle1-5區域突變株於血管新生特性之研究 12. 介白素19在生物體內之功能性分析 13. 含RGD序列蛋白在辨識組合蛋白上的結構與功能關係之研究 14. 探討人類凝血酶調節素抗凝活性之外的功能 15. 人類血纖維蛋白溶酶原之Kringle結構區對血管新生之功能分析     簡易查詢 | 進階查詢 | 熱門排行 | 我的研究室