【RNase R-核糖核酸酶R】E. coli exoribonuclease-circRNAs ...
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核糖核酸酶R (RNase R )是一種大腸桿菌核糖核酸外切酶 ( E. coli exoribonuclease),具有3'至5'核酸外切酶活性,能夠有效地消化幾乎所有的線性RNA ( linear RNA) 種類 ...
【RNaseR-核糖核酸酶R】E.coliexoribonuclease-circRNAs貨號E049
RNaseR 核糖核酸酶R |DNA&RNAModifyingEnzymes貨號E049 500U(50μl) 10U/ul
RNaseR
核糖核酸酶R(RNaseR)是一種大腸桿菌核糖核酸外切酶 (E.coliexoribonuclease),具有3’至5’核酸外切酶活性,能夠有效地消化幾乎所有的線性RNA( linearRNA)種類和Y結構RNA。
該酶不能消化具有短3’突出端(小於7個核苷酸)的環狀( circular),套索狀(lariat)或雙鏈(doublestranded)RNA,保留套索RNA的環部分。
因此,這種酶非常適合於研究由傳統剪接產生的套索RNA( circRNAs),以及通過反向剪接產生的circRNA。
RNaseR通過從細胞或RNA提取物中去除線性RNA,RNaseR經由RNA-sequencing有效鑑定環狀物種。
EnrichingcircRNAsinbiologicalsamples
•Identificationofintroniclariatsequences
•IdentificationofexoniccircRNAs
•Studyingalternativesplicing
•ProductionofartificialcircularRNAs
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Concentration
10U/μl
Storage
Storeallcomponentsat-20°C.Avoidrepeatedfreeze-thawcyclesofallcomponentstoretainmaximumperformance.Allcomponentsarestablefor1yearfromthedateofshippingwhenstoredandhandledproperly.
StorageBuffer
50mMTris-HCl(pH7.5),100mMNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,and50%(v/v)Glycerol.
ReactionBuffer
200mMTris-HCl,1MKCl,1mMMgCl2,pH7.5
RNaseR酵素使用注意事項
如果降解效率低,則使用稍高的孵育溫度(40-45°C)在中途補充額外的酶(0.5μl1小時)。
較高的溫度對於降解高度結構化的線性RNA(例如rRNA)特別有用。
超過45°C或孵育超過3小時,亦可能導致非酶促RNA降解。
最佳活性需要濃度為0.1-1.0mM的鎂( Magnesium)。
如果存在EDTA,則通過添加MgCl2至最終1.0mM進行補償。
RNaseR對tRNA,rRNA和其他高度結構化的RNA表現出低活性,其3’末端是雙鏈的,具有短的3’突出端。
這些RNA種類可使酶停滯並導致活性大大降低。
為獲得最佳結果,強烈建議從總RNA提取物中去除rRNA。
對於總RNA的消化,通常需要2-3小時的更長時間的incubations。
Oneunit定義為在37℃下在10分鐘內將1μgpoly(A) 轉化為酸溶性核苷酸( acid-solublenucleotides)的RNaseR的量。
DNaseI(RNAsefree) | DNaseI | T5Exonuclease |RNaseR核糖核酸酶R | T7EndonucleaseI | RNaseIII,E.coli | 核酸外切酶III(ExonucleaseIII)
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