Gel Filtration Chromatography

To purify ovalbumin and lysozyme from crude albumin solution (from Exp 2A) with different column chromatography (gel filtration and ion exchange). 　 　 Exp.3& 4  ColumnChromatography  I.                          Object Topurifyovalbuminand lysozymefromcrudealbuminsolution(fromExp2A)withdifferentcolumnchromatography (gelfiltrationandionexchange). II.                        Methods Pleasedescribe theprincipleusedingelfiltrationandionexchangechromatography. 請簡略描述 gelfiltration和ionexchange兩種層析法的原理. III.                     Results 1.    PlotOD280   vs.testtubeno.forExp3and4separately.         建議:Exp4 的結果如利用excel作圖(不需附原始數據)時, 先整理數據如下表,在圖中選擇[NaCl]那條線,按右鍵,選擇formatdataseries,format axis,將原來的primaryyaxis改為secondaryyaxis,即可畫出第二y 軸(如下圖)。

這樣便可看出蛋白質是在多少[NaCl]濃度被沖洗出管柱. 您的瀏覽器不支援內置框架或目前的設定為不顯示內置框架。

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        2. Lookupthe molecularweightandpIofovalbumin,lysozymeandVit.B12,andpredicttheeluted orderofthesemolecules.       建議:查分子量可以從藥品的目錄上查。

Example: Sigma-Aldrich廠提供許多生化實驗用到的藥品、試劑等。

              其網址為http://www.sigma-aldrich.com=>search center=>打入藥品的全名(Vit B12:cobalamin)=>Search(fulltext)=>從找出的結果中點選你要的藥品 =>cobalamin.  另一家藥廠: http://www.acros.be/(這兩個都是國外的網址,通常要趁網路不忙時才能連線..) 3. BasedonthemolecularweightandpIofthesetwoproteins,predictthe proteincompositionofeachpeakfromthegraphabove. IV.                    QuestionandDiscussion      1.  Ifovalbuminandlysozymecameoutofthecolumnunseparated(as showninthefigbelow),whatexperimentalconditioncanbemodifiedtoseparate thesetwoproteins? Inotherwords,howtoincreasetheresolutionbetween AandB?  如果實驗中ovalbumin, lysozyme同時流出,請問可改變那些實驗條件,以達分離的目的？請分別討論 gelfiltration 和ion exchange chromatography的情況, 並說明原因. 提示:兩種管柱層析時所使用的樣品體積都分別為800ml 及4ml, 而gelfiltration 的珠珠體積為50ml,ion exchange 的珠珠體積為2ml.                     2.    Otherthingsyouwanttodiscuss. V.                      Reference 1.    Pleasecitethereferencesifyouuseany, includingthewebresources. 　                     與此Web有關的問題應直接送至[email protected]。

Copyright(C)2004 Allrightsreserved. 上次更新日期： 2005年08月11日。