小鼠懷孕天數?

9. 小鼠如何分辨公母？ 公鼠：生殖器離肛門口的距離較母鼠遠，較大 ... 1.      小鼠 tailDNA要如何抽 ? 市面上有許多抽tail的kit。

Core 目前所使用的Kit 為Promega WizardGenomic-DNAPurificationKit。

  2.      小鼠 tailDNA要怎麼typing ? 請在修飾過的區域設計一組primer，可區分WT與Targeted 的DNA片段，大小約 300-500bp，再以PCR的方式進行check。

  3.      如何確定移交chimera 時間 ? 待仔鼠出生約1個月可離乳，core連絡人員會與user連絡告知狀況並約定時間移交。

  4.      移交chimera mice是否需要自行帶cage ? 請自行準備含墊料乾淨滅菌的cage   5.      Implantation結束後何時可以得到chimera ? 從Implantation結束後17天，即可得到chimera，再待28天仔鼠離乳。

  6.      小鼠懷孕天數? 平均懷孕期為19-21天   7.      小鼠離乳天數 ? 在出生後3-4週(約28天)才可離乳。

  8.      小鼠幾週性成熟？ 出生6~8週後小鼠性成熟，建議 chimera公鼠在7週時可開始配種。

  9.      小鼠如何分辨公母？ 公鼠：生殖器離肛門口的距離較母鼠遠，較大週數的公鼠可以看到睪丸。

母鼠：生殖器離肛門口的距離較公鼠近，可以看到腹部有4對乳頭。

  10.  小鼠一直被吃掉該怎麼辦 ? 飼養環境需保持安寧，避免震動及噪音，母鼠懷孕後期放置巢料和飼料在籠內，出生後ㄧ週內避免更換墊料及移動cage，出生ㄧ週後更換墊料時，會取部份舊巢料置於新cage中，並將仔鼠放置在巢料中以免驚擾母鼠。

   11.  動物的飼養環境?飼料廠來及編號? 飼料品牌:altromin 編號:13200; 墊料品牌: lignocel德國硬木,白楊木 樂斯科：白楊木桃木片 IVC廠牌:biorone 112-120ACH                     12.  小鼠幾週可以剪尾或是剪趾做Typing？ 在小鼠約2週大時，可以剪尾或是剪趾來做Typing。

  13.  如何breeding chimera以得到Germline ? ㄧ公二母不分籠：將2隻母鼠放進已獨立分籠chimera 的籠子裡，小鼠出生後並不將母鼠或是公鼠取出，而小鼠直到離乳、再進行分籠的動作。

優點：籠位需求少；缺點：速度較慢   公鼠獨立分籠，母鼠每週替換：將chimera 獨立分籠，每次放入2隻性成熟的母鼠，七天以後放入新的2隻母鼠，舊的母鼠則分籠觀察是否懷孕。

優點：速度較快；缺點：籠位需求多   14.  User 取得chimera後，如何進行後續Breeding? 129/svChimera 一.當使用者委託核心進行A4-3嵌合鼠產製 (Chimeraproduction)服務完成後，核心移交至少2隻嵌合鼠公鼠。

二.小鼠性成熟約6~8周，待嵌合鼠性成熟以後，以一公二母的方式在傍晚時放入兩隻 C57BL/6J母鼠進行配種。

三.小鼠交配時間一般在凌晨時，如公鼠與母鼠進行配種，則可在當天早上發現母鼠陰道口有陰道栓塞，從發現陰道栓塞那天起紀錄為母鼠懷孕0.5天，而母鼠的懷孕週期約19~21天。

四.配種方式    1.每日觀察母鼠是否懷孕     每天早上觀察母鼠是否有陰道栓塞。

如果有觀察到，則將母鼠標號紀錄並分籠，然後再放入新的母鼠替補，隔天再繼續觀察是否有陰道栓塞。

如果沒有發現，則隔日早上再觀察。

   2.每周替換母鼠     若動物房無法每天觀察時，可一周替換一次母鼠，並將替換下來的母鼠分籠觀察，如果母鼠懷孕，在懷孕約14天時，腹部會有明顯腫大的情形。

   3. 採自然交配(母鼠不取出)     將公鼠和母鼠以一公二母的方式配種，而母鼠不與公鼠分籠，直到新生小鼠離乳再進行新生小鼠的分籠。

五.接近生產後期約14天以後，爲避免母鼠驚擾導致難產或是新生小鼠死亡，可給予巢片或視情況提前墊料更換。

新生小鼠出生一周內務必停止更換墊料，並注意飲水和飼料供給，特別是生第一胎的新手母鼠容易因受到驚嚇而將新生小鼠咬死。

六.當新生小鼠二周大開眼時，可以取尾巴或是剪腳趾做PCR typing。

由於核心所使用的細胞株為129/Sv，毛色基因型為A/A表現型agouti相對於C57BL/6J毛色基因型a/a表現型black為顯性，因此毛色agouti的新生小鼠才有可能是我們所要的，因此只需取毛色agouti 的新生小鼠樣本做PCR Typing即可。

等到最後4周大時新生小鼠就可以離乳分籠繼續後續實驗。

  Agouti-B6(JM8A3) Chimera 公鼠與母鼠的配法與129/sv chimera的ㄧ樣，但因為核心所顯微注射的Agouti-B6 EScellline爲JM8A3。

毛色基因為A/a，表現毛色為agouti。

而C57BL/6J6老鼠的毛色基因為a/a，表現毛色為black。

因此無法依據毛色來選擇那些新生小鼠需要typing與否。

所以母鼠所生的每一隻小鼠都需要做PCR typing。

待結果出來4周大以後就可離乳進行後續實驗。

  15.  Chimera生下來的子代是否都需要剪尾作 PCRTyping？   當User 拿到的chimera品種不同時，需有不同的作法   chimera為129品系：只需對毛色為Agouti 的子代進行剪尾、PCR Typing。

  chimera為JM8A品系：不論毛色，所有的子代都需剪尾、PCR Typing   16.  Backcross 需進行幾代？ Backcross建議進行10代，如此ㄧ來和 backcross的品系可以達到99.9% 的的相似度。

  17.  核心設施提供的ES cellline與Blastocyst的Strain與毛色是? 核心設施目前提供的EScellline有兩種品系，分別是R1 (129SVJ, 栗色) 與JM8A3 (B6,栗色)，blastocyst則是B6品系 (黑色) 的小鼠提供，如果嵌合率越高，則出生的嵌合鼠的毛色會越偏向ES cell(栗色)，反之嵌合率低，則是黑色。

　 18.總共會 inject多少顆EScell? 平均一隻小鼠會 inject15~20顆blastocyst(withEScell)，一次進行三隻。

根據嵌合鼠產製服務使用規範，最終至少交付兩隻嵌合公鼠(毛色≧70％嵌合度)。

當本核心未能交付任務，則將免費注射 60顆囊胚，如仍無法完成任務，該項申請仍需結案且使用者必需付費。

  19.如果老鼠出生的比例未符合1:2:1時，怎麼辦? 1.請再次確認親代的typing是否正確。

2.請確認PCR 的策略是否正確。

3.請做 southernblot確認PCRtyping的正確性。