國立成功大學機構典藏

Contributors: 生物化學暨分子生物學研究所 賴明德. Lai, Ming-Derg ; Keywords: tRNA基因重複數 密碼使用率 轉譯效率 tRNA gene copy number codon usage 國立成功大學機構典藏:Item987654321/134831 English  |  正體中文  |  简体中文  |  Itemswithfulltext/Totalitems:108019/145390(74%) Visitors:16774059      OnlineUsers:33 RCVersion7.0©PoweredByDSPACE,MIT.EnhancedbyNTULibraryIRteam.ReEnhancedbyNCKULibraryIRteam. Scope AllofNCKUR CollegeofMedicine    DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology       --DisserationandTheses Tips:pleaseadd"doublequotationmark"forqueryphrasestogetpreciseresultspleasegotoadvancesearchforcomprehansiveauthorsearch Adv.Search Home ‧ Login ‧ Upload ‧ Help ‧ About ‧ Administer NCKUR > CollegeofMedicine > DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology > DisserationandTheses >  Item987654321/134831 Loading... Metadatanull DataExportasEndnoteRISformat DataExportasBibtexformat CitationInfomation Pleaseusethisidentifiertociteorlinktothisitem: http://ir.lib.ncku.edu.tw/handle/987654321/134831 Title: 探討tRNA豐富度對於蛋白質表現量的效應 OtherTitles: TheEffectsoftRNAAbundanceonProteinExpression Authors: 歐姱君Ou,Kua-Chun Contributors: 生物化學暨分子生物學研究所賴明德Lai,Ming-Derg Keywords: tRNA基因重複數密碼使用率轉譯效率tRNAgenecopynumbercodonusagetranslationefficacy Date: 2013-07-09 IssueDate: 2013-10-1814:35:16(UTC+8) Abstract: 治療性的蛋白質藥物在製造上需要被大量生產且最終折疊成具有生物活性的形式。

蛋白質合成過程的關鍵因子包括mRNA5’端的結構，核糖體密度與tRNA豐富度；而在其中tRNA豐富度仍不是完全清楚。

在轉譯期間，同義密碼對應到tRNA同?受體的機率並不同，可轉譯出相同胺基酸，此現象稱為密碼子使用偏好，而這種使用偏好在不同物種間有顯著的差異。

過去文獻已經顯示tRNA豐富度與密碼使用率或tRNA基因重複數有關連性；然而，這些研究結果並無一致性而且取決於物種個體。

因此，我們想要探討在中華倉鼠細胞株內，tRNA基因重複數，密碼使用率與tRNA豐富度在蛋白質表現效率上的影響。

首先，我們建立三個不同介白素-2基因，即具有不同mRNA序列，皆可轉譯出相同胺基酸序列。

第一個根據tRNA基因重複數少與密碼使用率高的密碼做改變，另一個以tRNA基因重複數多與密碼使用率低的做修改，最後一個根據tRNA基因重複數多且密碼使用率高的密碼做修飾。

我們以酵素連結免疫法分析於培養液中被分泌的介白素-2，比較改變tRNA基因重複數與密碼使用率後的蛋白質表現量。

將介白素-2修飾為tRNA基因重複數少與密碼使用率高者表現量較更改為tRNA基因重複數多與密碼使用率高者低，但是其表現量又比改變為tRNA基因重複數多與密碼使用率低者高。

除了介白素-2更改為tRNA基因複製數多且密碼使用率高者外，其他組之介白素相比於野生型皆無明顯改變。

利用外送丙胺酸、纈草胺酸、羥丁胺酸tRNA的方式提高tRNA的表現量後，發現介白素-2的蛋白表現量沒有顯著差異。

接下來，我們以次世代定序系統測定中華倉鼠細胞株的tRNA，透過CLCGenomicsWorkbench軟體分析，結果顯示細胞內所含的tRNA近似於密碼使用率。

綜合以上的結果，tRNA密碼使用，而非基因重複數，可能直接影響到tRNA豐富度於哺乳類動物細胞中。

TherapeuticproteindrugsneedtobeproducedinlargeamountintheirbiologicalactiveformKeyfactorsinproteinsynthesisincludethe5’endstructureofmRNAribosomaldensityandtRNAabundance;inadditiontRNAabundanceremainspoorlyunderstoodDuringtranslationsynonymouscodonsadaptedtotRNAisoacceptorsaretranslatedintothesameaminoacidwithdifferentfrequenciesaphenomenontermedcodon-usagebiaswhichisdramaticallydifferentamongspeciesPreviousreportshaverevealedthepossiblecorrelationbetweentRNAabundanceandtRNAgenecopynumberorcodonusage;howevertheresultsareinconsistentanddependedontheorganismsThereforewewanttostudytheeffectsoftRNAgenecopynumbercodonusageandtRNAabundanceonproteinexpressionefficiencyinChinesehamsterovary(CHO)cellsFirstwecreatedthreeinterleukin-2(IL-2)genescontainingthesameaminoacidsequencebutwithdifferentcodons(differentmRNAsequences)OneismodifiedaccordingtolowtRNAgenecopynumberandhighcodonusageanotherischangedbasedonhightRNAgenecopynumberandlowcodonusageandtheotherisalteredtocodonwithhightRNAgenecopynumberandhighcodonusageTocompareexpressionlevelofcodonusage-andgenecopynumber-changedIL-2wedeterminedtheamountofsecretedIL-2inmediumwithenzyme-linkedimmunosorbentassayIL-2withlowtRNAgenecopynumberandhighcodonusagewasexpressedatlowerlevelthanIL-2withalteredhightRNAgenecopynumberandcodonusagebutitexpressedhigherlevelofIL-2thanthatwithchangedtohightRNAgenecopynumberandlowcodonusageExceptforthegroupofIL-2withhightRNAgenecopynumberandhighcodonusagenodramaticchangesofIL-2expressioninothergroupswereobservedcomparedtowildtypeEnhancingtRNAexpressionbytransfectionoftRNAforvalinealanineandthreoninedidnotleadtosignificantchangeinIL-2proteinexpressionNextweinvestigatedtRNAcontentinCHOcellsbynextgenerationsequencingandusedCLCGenomicsWorkbenchsoftwareforanalysisTheresultsdemonstratedthattRNAabundanceisdependedoncodonusageasaproxyinCHOcellsTakentogetherselectionofcodonusageratherthantRNAgenecopynumbermaydirectlyaffecttRNAabundanceinmammaliancells AppearsinCollections:[DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology]DisserationandTheses FilesinThisItem: File Description SizeFormat index.html0KbHTML533View/Open AllitemsinNCKURareprotectedbycopyright,withallrightsreserved. RelatedItemsinTAIR DSpaceSoftware Copyright © 2002-2004  MIT &  Hewlett-Packard /  Enhancedby  NTULibraryIRteam Copyright ©    /  ReEnhancedby  NCKULibraryIRteam  - Feedback