竹嵌紋病毒基因體轉譯架構ORF1產物之表現、純化及分析

根據竹嵌紋病毒(bamboo mosaic virus)基因體的核酸序列分析﹐ORF1(長約4Kb)的遺傳訊息應可轉譯出一個分子量達155仟道耳吞(KDa)的蛋白質﹐推測此蛋白之功能應與基因體 ... 資料載入處理中... 跳到主要內容 臺灣博碩士論文加值系統 ::: 網站導覽| 首頁| 關於本站| 聯絡我們| 國圖首頁| 常見問題| 操作說明 English |FB專頁 |Mobile 免費會員 登入| 註冊 功能切換導覽列 (188.166.176.73)您好！臺灣時間：2022/07/0314:21 字體大小：       ::: 詳目顯示 recordfocus 第1筆/ 共1筆  /1頁 論文基本資料 摘要 外文摘要 紙本論文 QRCode 本論文永久網址: 複製永久網址Twitter研究生:李宜佳研究生(外文):Li,Yi-Ija論文名稱:竹嵌紋病毒基因體轉譯架構ORF1產物之表現、純化及分析論文名稱(外文):Overexpression,purificationandcharacterizationoftheopenreadingframe1productofbamboomosaicvirus指導教授:孟孟孝指導教授(外文):Meng-HsiaoMeng學位類別:碩士校院名稱:國立中興大學系所名稱:農業生物科技學研究所學門:農業科學學門學類:農業技術學類論文種類:學術論文論文出版年:1997畢業學年度:85語文別:中文論文頁數:78中文關鍵詞:竹嵌紋病毒、甘油密度梯度離心、戴帽、複製作用外文關鍵詞:bamboomosaicvirus、glycerolgragientcentrifugation、capping、replication相關次數: 被引用:7點閱:161評分:下載:0書目收藏:0 根據竹嵌紋病毒(bamboomosaicvirus)基因體的核酸序列分析﹐ORF1(長約4Kb)的遺傳訊息應可轉譯出一個分子量達155仟道耳吞(KDa)的蛋白質﹐推測此蛋白之功能應與基因體複製及正股RNA之戴帽(capping)有關。

欲獲得足夠量純化之155仟道耳吞(KDa)蛋白質﹐以利酵素功能之研究﹐以PCR技術增幅ORF1相對cDNA片段﹐插入pET32、pET29等表現載體在大腸桿菌株BL21(DE3)﹐以N端為S*tag(15個胺基酸)連結蛋白質(fusionprotein)或thioredoxin-S*tag的連結蛋白質(fusionprotein)形式大量表現。

分別以S-protein親和性膠質及甘油密度梯度離心二種方法作部份純化﹐以得到的蛋白質分別對數段長約200bases的RNA進行複製反應測試﹐發現當基質為正股RNA3*端之片段或負股RNA3*端之片段時﹐a-P32-GTP或a-P32-UTP中之-P32皆可被併入基質RNA中﹐但是對5*端RNA或胡瓜嵌紋病毒衛星核酸(CMVsatelliteRNA)無任何反應。

可知此一155仟道耳吞(KDa)的病毒可能具有RNA-dependentRNApolymerase(RdRp)的活性﹐但不具有對5*端RNA進行capping的能力。

若以核酸S1水解來鑑定複製反應測試後的產物，發現其為單股RNA，因此推測所觀察到的現象可能並非完整的複製作用。

Theproductofopen-readingframe1(ORF1)ofbamboomosaicvirus(BaMV)hasbeenpostulatedtobeareplicasethatisinvolvedinthereplicationofviralgenomeandinthecappingreactionofthepositivestrandRNAaccordingtotheanalysisofnucleotidesequence.Inthisstudy,thecorrespondingcDNAwasinsertedintopET-32aorpET29aandtransformedintoEscherichiacolistrainBL21(DE3).Therecombinantviralprotein,fusedatN-terminuswiththioredoxin,wasover-expressedundertheinductionofisopropylb-D-thiogalactopyranoside,andpartialpurifiedbydifferentialS*Tagaffinitychromatographyorglycerolgradientcentrifugation.ThepurifiedenzymewasabletoproduceP32-labeledRNAfragmentsupontheadditionofparticularRNAsubstrates.AmongtheRNAmoleculestestedinthisstudy,suchreactionwasobservedwhenthesubstratewas3*-terrminalfragmentofpositivestrandornegativestrandRNAofBaMV.ThesensitivityoftheP32-labeledRNAproductstonucleaseS1digestionsuggeststhattheywerearisefromtheincorporationofa-P32-GTPora-P32-UTPmoietyat3*-endofRNAsubstrates.Neitherguanylyltransferaseormethyltransferasewasobservedinthisstudy.  國圖紙本論文 推文 網路書籤 推薦 評分 引用網址 轉寄                                                                                                                                                                                                                    top 相關論文 相關期刊 熱門點閱論文 1. 竹嵌紋病毒複製酵素之N端區域的功能分析 2. 竹嵌紋病毒類解旋酵素之特定胺基酸對酵素活性及病毒於白蔾內存活的影響 3. 竹嵌紋病毒RNACappingEnzyme上之特定胺基酸對其Guanylyltransferase活性的影響 4. 一、竹嵌紋病毒戴帽酵素中參與SAM結合與催化甲基轉移能力之氨基酸探討。

二、建立竹嵌紋病毒於酵母菌中之完整複製系統。

5. 竹嵌紋病毒端帽酵素之純化效率與活性的增進 6. 竹嵌紋病毒複製酵素之CappingEnzyme重新摺疊對其活性回復的探討 7. 重組竹嵌紋病毒戴帽酵素之生產效率提升 8. 衛星核酸干擾竹嵌紋病毒複製之探討與應用 9. 竹嵌紋病毒衛星核酸複製機制的研究 10. 竹嵌紋病毒核酸基因體3′端非轉譯區多重功能之探討:病毒複製､長距離移動和增A訊號等功能   無相關期刊   1. 歐盟對人權違反國家實施經濟制裁之研究 2. 蔡英文政府時期中共對台政策 3. 1996~2016年的中華民國(臺灣)對中政策選擇 4. 歐盟紓困政策對受援國境內民粹主義現象之影響與比較:以希臘和愛爾蘭為例 5. 後冷戰以來的中巴軍事合作研究 6. 國際難民保護制度的發展與困境 7. 歐洲聯盟對中國政策之研究：以貿易預期理論分析 8. 北冰洋議題及其解決機制之研究：以新自由制度主義為分析途徑 9. 食物浪費成因探討：歐盟主要會員國比較研究 10. 蔡英文時期兩岸關係發展之研究 11. 胃幽門螺旋桿菌之膽固醇醯基葡萄糖苷與其生合成酵素：扮演破壞宿主胞的自噬功能及細胞極性之角色 12. 硼酸修飾金塗覆鋁晶片結合基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜術應用於醣蛋白之純化及鑑定 13. (1)開發三甲基矽乙酸酯做為醣類三甲基矽烷保護基的新型試劑(2)C-3三氟甲基酮之三苯基磷亞胺香豆素衍生物合成策略及酸催化重排反應之探討 14. 應用於有機太陽能電池之具有共軛架橋基紫質受體和融合紫質之合成 15. 在酸性條件下藉由鈀金屬催化具胺基取代之萘醌化合物進行碳氫鍵活化與增環反應     簡易查詢 | 進階查詢 | 熱門排行 | 我的研究室