RNA編輯調控COPA基因表現與功能之探討

DNA轉錄成RNA再進行轉譯形成蛋白質，其過程受到一連串的調控，RNA編輯是其中重要的調控機制。

RNA編輯型態有許多，在高等真核生物中最具代表性的即 ... 資料載入處理中... 跳到主要內容 臺灣博碩士論文加值系統 ::: 網站導覽| 首頁| 關於本站| 聯絡我們| 國圖首頁| 常見問題| 操作說明 English |FB專頁 |Mobile 免費會員 登入| 註冊 功能切換導覽列 (188.166.176.73)您好！臺灣時間：2022/07/0315:48 字體大小：       ::: 詳目顯示 recordfocus 第1筆/ 共1筆  /1頁 論文基本資料 摘要 外文摘要 目次 參考文獻 電子全文 紙本論文 論文連結 QRCode 本論文永久網址: 複製永久網址Twitter研究生:岳聖涵研究生(外文):ShengHanYueh論文名稱:RNA編輯調控COPA基因表現與功能之探討論文名稱(外文):RegulationoftheExpressionandFunctionofCOPAbyRNAEditing指導教授:譚賢明指導教授(外文):B.C.Tan學位類別:碩士校院名稱:長庚大學系所名稱:生物醫學研究所學門:生命科學學門學類:生物化學學類論文種類:學術論文論文出版年:2016畢業學年度:104語文別:中文論文頁數:73中文關鍵詞:RNA編輯、ADAR、COPA、蛋白質運輸、蛋白質醣基化、內質網壓力外文關鍵詞:RNAediting、ADAR、COPA、proteintrafficking、proteinglycosylation、ERstress相關次數: 被引用:0點閱:94評分:下載:0書目收藏:0 DNA轉錄成RNA再進行轉譯形成蛋白質，其過程受到一連串的調控，RNA編輯是其中重要的調控機制。

RNA編輯型態有許多，在高等真核生物中最具代表性的即為adenosine-to-inosine(A-to-I)的RNA編輯。

A-to-IRNA編輯是由AdenosineDeaminaseActingonRNA(ADAR)蛋白作用於precursor-mRNA(pre-mRNA)上的adenosine使其脫氨成為inosine。

實驗室透過NGS資料庫發現coatomerproteincomplex,subunitalpha(COPA)基因的編碼區中有ADAR酵素所主導的RNA編輯，使得編碼區中的ATT變為GTT(A490G)，而胺基酸序列由Isoleucine改變成為Valine(I164V)。

初步的結果顯示RNA編輯未能影響COPA蛋白質穩定性及RNA轉譯效率。

然而實驗結果顯示ADAR在HeLa細胞中會提升COPA的蛋白質表現，但在MCF7或HEK293並沒有這樣的現象。

在COPA生理功能的探討中，COPA對蛋白質的醣基化及內質網壓力的調控確實扮演著重要角色，但RNA編輯對COPA的生理調控並不明顯。

除了細胞實驗，也利用老鼠的不同組織分析ADAR下游基因的編輯程度。

發現COPA在腦區的編輯程度較肝臟低；相反的TMEM63B則是肝臟高於腦區。

未來將探討在腦區及肝臟中ADAR及COPA和TMEM63B的precursor-mRNA的關係蛋白。

儘管RNA編輯對COPA的生理調控依舊未知，COPA可作為研究ADAR作用機制的標的。

Theprocessofgeneexpressionisunderaseriesofregulations,amongwhichRNAeditingrepresentsoneimportantregulatorymechanism.ThereareseveralkindsofRNAediting,andthemostprevalenttypeinhighereukaryoticcellsisadenosine-to-inosine(A-to-I)editing.A-to-IeditingiscarriedoutbytheadenosinedeaminaseactingonRNA(ADAR)enzymefamilymembers,whichareresponsibleforconvertingadenosinestoinosinesinpre-mRNAthroughdeamination.TheA-to-IRNAeditingcanbeconsideredasA-to-GRNAeditingbecauseinosinescanpairwithcytosines.Ourresultshaveshownthatthecodingdomainsequence(CDS)ofcoatomerproteincomplex,subunitalpha(COPA)iseditedbyADARenzymes.RNAeditingchangesCOPAA490toG,resultinginaminoacidsubstitutionfromIsoleucinetoValine(I164toV).FurtheranalysisshowedthatRNAeditingaffectsneithertheproteinstabilitynorthetranslationefficiencyofCOPA.However,wefoundthatADARmayup-regulatetheproteinexpressionofCOPAinHeLacells,butnotinMCF7orHEK293celllines.FunctionalstudiesofCOPAanditseditingrevealedthateventhoughCOPAhasanimportantroleinproteinglycosylationandERstressregulation,itseditinghadslighteffectsinthesefunctionalaspects.Besidesinvitrostudies,wealsocharacterizedtheeditinglevelofADARdownstreamgenesindifferentmousetissues.Thisanalysisdemonstratedatissue-specificeditingprofilesofCOPA–editinglevelinbrainislowerthaninliver.Incontrast,otherrecodingtargetssuchasTMEM63Bhadhighereditinglevelinbrainthaninliver.Tofurtherexaminethisregulation,weexploredanydifferencesintheinteractionproteinsofADARsaswellasoftheCOPAandTMEM63Bpre-mRNAinbrainandinliver.WhilenoprominentbiologicalconsequencesofCOPAeditingwerefoundinthisstudy,itstillservesasarelevantmodeltostudythemechanismofADAR. 指導教授推薦書…………………………………………………………論文口試委員審定書……………………………………………………誌謝……………………………………………………………………iii中文摘要………………………………………………………………ivAbstract…………………………………………………………vi目錄………………………………………………………………viii圖目錄………………………………………………………………...xi附錄目錄………………………………………………………………...xii第一章緒論……………………………………………………………11.1ADAR介紹………………………………………………………11.2蛋白質運輸及COPA功能之簡介……………………..…………21.3內質網壓力與UPR……….……………………………………51.4研究動機…………………………………………………………61.5實驗設計…………………………………………………………7第二章實驗方法………..………………………………………………102.1種植細胞………….……………………………………………102.2轉染..……………………………………………………………112.3西方墨點法…………….………………………………………112.4RNA萃取及反轉錄反應………….…………………………...122.5即時定量聚合酶連鎖反應……………………………………132.6DNA膠體純化…………………………………………………132.7接合反應…………………………………………………………132.8質體轉型………….……………………………………………142.9限制酶剪切反應…………………………………………………142.10質體萃取……………………………………………………142.11引子黏合………...……………………………………………152.12引發內質網壓力及分析………………………………………152.13分離RNC…………………………………………………162.14Lectinblot………………………………………………162.15免疫沉澱………………..…………………………………172.16免疫螢光染色……………………..…………………………18第三章實驗結果………………………………………………………193.1ADAR對COPARNA的編輯……………...……………………193.2RNA編輯對COPA表現量的影響………….……….…………193.3RNA編輯對醣基化蛋白質的影響……………………………213.4RNA編輯對內質網壓力的影響………………………………223.5ADAR下游基因的編輯程度具有組織特異性…………………23第四章結果討論及未來研究方向……………………………………264.1RNA編輯對COPA表現量的影響……………………………264.2RNA編輯對蛋白質醣基化的影響…………………...…………274.3RNA編輯對內質網壓力的調控………...………………………284.3COPA的RNA編輯具有組織特異性………...…………………29參考文獻………………………………………………………………31圖表……………………………………………………………………36附錄…………………………………………………………………......58圖目錄圖一、ADAR對COPARNA之編輯……………...…………………36圖二、ADAR2對COPA表現量的影響…………...…………………37圖三、細胞內生性COPA置換效率測試……………………………39圖四、蛋白質穩定性及轉譯效率測試……………………….………42圖五、ADAR2對COPA醣基修飾的影響……………...….…………44圖六、RNA編輯對內質網壓力的影響……………….……...………47圖七、營養物缺乏下RNA編輯對內質網壓力的影響………………49圖八、Copa及Tmem63b在編輯程度上具有組織特異性…………...51圖九、ADAR2抗體免疫沉澱效率測試及RNA二級結構預測…….53圖十、Copa與Tmem63b選殖片段編輯程度分析…………..………56附錄目錄Table1.引子列表……………………………………………………58Table2.抗體………………………………………………………...60 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 電子全文  國圖紙本論文 連結至畢業學校之論文網頁點我開啟連結註:此連結為研究生畢業學校所提供，不一定有電子全文可供下載，若連結有誤，請點選上方之〝勘誤回報〞功能，我們會盡快修正，謝謝！ 推文 網路書籤 推薦 評分 引用網址 轉寄                                                                                                                                                                                                                    top 相關論文 相關期刊 熱門點閱論文 1. 植物內質網恆定之研究 2. 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